Resume
Samenvatting - Practicum: biochemie en biotechnologie, PCR (J000496A)
- Établissement
- Universiteit Gent (UGent)
Volledige samenvatting van Practicum PCR Leerpaden + powerpoints
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
Aperçu du contenu
Practicum PCR DNA-profiel: DNA fingerprint
o DNA-profiel dat wordt verkregen, vergelijken met dat van de verdachte
Vingerafdrukken: dactyloscopie
‘match’ of ‘geen match’: verdachte wordt gelinkt of uitgesloten
DNA in de cel
In de kern = nucleair DNA/Genomisch DNA
Chromosomen
Uniek
In het cytosol = mitochondriaal DNA
Genomisch DNA
Coderend DNA (‘genen’)
Genetische informatie
Coderen voor eiwitten
Niet-coderend DNA (‘extra genetisch’)
Junk DNA
Grootste deel van het genoom
Geen fenotypische kenmerken
o Uitzondering: het geslacht
We zoeken naar regio’s in het DNA die verschillen tussen personen
Variabele regio’s in het
DNA = Short Tandem Repeats (STRs)
Identieke, repetitieve units
o Analyse van kleine fragmenten
Zeer polymorf
Merkers selecteren zover mogelijk van elkaar
in het genoom, op verschillende
chromosomen
Geslacht: Amelogenine merker op het
geslachtschromosoom: XX of XY
Locus: plaats op het genoom, waar de merker zich bevindt
Allel: varianten van een merker (aantal repeats)
Homozygoot: allelen op beide chromosomen zijn gelijk
Heterozygoot: Allelen van een bepaalde merker op beide chromosomen zijn verschillend
Opstellen DNA-profiel
, Cellen losweken van de dragen (bv. speekselcellen)
DNA extraheren uit de cellen mvb Chelex
o Chelex: hars, in de oplossing zullen minder ionen zitten
Osmotische kracht: cel neemt water op
Concentratie aan ionen in de cel daalt, en
wordt gelijk aan de concentratie van ionen
buiten de cel
Door de osmotische druk zal de cel barsten
Zachte lyse bij 56°C osmose (cellen komen allemaal op barsten te
staan)
Harde lyse bij kooktemperatuur openbreken cellen en denaturatie
van de proteïnen (DNA is vrijgekomen)
Vrijgekomen DNA beschermen voor afbraak door DNasen
o Afcentrifugeren: zware materiaal (bv. Chelex) op de bodem, DNA opgelost in de
waterige oplossing (= supernatans)
Goed scheiden want Chelex zal ionen capteren die het enzym tijdens de PCR
nodig heeft
DNA vermenigvuldigen adhv PCR:
o Detectie van de DNA-fragmenten mbv capillaire electroforese
o = DNA-amplificatie
o DNA-polymerase nodig (Taq)
Organisme dat bij kooktemperaturen overleeft,
polymerase zal niet denatureren
o Enkelstrengig DNA nodig als ‘template’ voor synthese van
complementaire nieuwe streng
o Klein stukje dubbelstrengig DNA nodig om de polymerase te
starten (primers toevoegen)
Cycli van denaturatie, annealing en elongatie
Denaturatie van een dubbelstrengige helix,
enkelstrengig DNA maken
Annealing: kleine regio’s met nieuw dubbelstrengig DNA wordt gemaakt
Hiervoor primers (enkelstrengig DNA) aangemaakt: zijn
complementair met fragment van template DNA
Temperatuur verlagen naar 58°C zodat enkel de primers kunnen
binden/hybridiseren op het DNA
Polymerase bindt op deze nieuw gevormde stukjes
Annealing T: primers binden = smelttemperatuur v. DNA
Smelttemperatuur v. DNA
o 50% primers gebonden aan DNA
o Afh. v. [C] en [G] gehalte (hebben 3 H-bruggen ipv. 2 H-
bruggen bij A en T)
o Hoe meer H-bruggen, hoe sterker de reactie, hoe meer
energie nodig, hoe hoger smelttemperatuur
Voor elk fragment bij het begin en einde een primer toevoegen
o Smelttemperatuur v. beide primers moet gelijk zijn zodanig
dat er geen aspecifieke bindingen kunnen plaatsvinden
o Tm te laag (tov. Ta) : geen annealing
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur marthevanlerberghe. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €8,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
53340 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans