Resume
Samenvatting - Practicum: biotechnologie en biochemie, PCR resultaten (J000496A)
- Établissement
- Universiteit Gent (UGent)
Volledige samenvatting van Practicum PCR resultaten Leerpaden + powerpoints
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Practicum PCR:Resultaten
Tijdens practicum:
DNA extraheren en amplificeren dmv een PCR reactie
Sporen drager losweken DNA uit celkernen extraheren mbv. Chelex
o Chelex: cellen oiv. osmotische druk openbarsten + DNA komt vrij
Sporen- en referentiestalen
Vrijgekomen DNA: PCR reactie
o Multiplex: 5 verschillende lotie amplificeren
4 STRs merkers (TH01, D21S11, D8S1179 & D18S51) + Amelogeninemerker
Obv. Amelogeninemerker afleiden als het een vrouwelijk of mannelijk staal is
Detectie:
Dmv. Capillaire elektroforese
o Mix van formamide en LIZ (= interne standaard) toevoegen aan de stalen
Voor ze geladen werden op de ce
o Nauwkeurige scheiding en exacte lengtebepaling mogelijk
o Formamide: DNA gedenatureerd houden (enkelstrengig)
o LIZ standaard: interne standaard voor elk staal
Obv. dit staal kan de lengtebepaling uitgevoerd worden
Capillaire elektroforese
Volgorde analyseresultaten
1. STR-profiel van negatieve controle bekijken
a. Moet blanco zijn want geen DNA aan toegevoegd
b. Wel pieken contaminatie
2. STR-profiel van positieve controle bekijken
a. Gekend DNA toegevoegd voor PCR amplificatie
i. We weten exact welke allelen we verwachten voor de verschillende lotie
b. Nagaan of verwachte allelen voorkomen op STR-profiel
i. Correct? PCR is goed doorgegaan
3. Andere stalen vergelijken met elkaar match te vinden tss sporen en referentieprofielen vd.
verdachten
Per staal de interne standaard bekijken
o Oranje aangeduid
o Obv. deze gekende lengtes, worden de lengtes vd. andere allelen bepaalt
o Geen pieken op profiel primer piek zichtbaar?
Enkel weergegeven als er geen duidelijke pieken zichtbaar zijn
Primer piek: helemaal links op profiel want heeft maar een lengte van ±20
basenparen
Piek toont alle ongebonden gelabelde primers: kort dus elueren eerst
Piek aanwezig? Primers toegevoegd aan PCR + PCR product toegevoegd bij
het laden op de capillaire elektroforese (zegt niet dat PCR is doorgegaan)
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