Resume
Samenvatting Early drug discovery
- Établissement
- Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
Dit is een samenvatting over het deel early drug discovery
[Montrer plus]
Aperçu du contenu
Early drug discovery (Dewitte)Biologie
• In vitro antiproliferation assay (cellen)
o Giso = grove inhibitoren: concentratie die 50% van de cellen inhibeert
1. Cellen in wells via steriel medium
2. Incubator → proliferatie
3. Indicator die gemetaboliseerd wordt → meer kleur = meer proliferatie
4. Inhibitor toevoegen → verschil in kleur meten
• In vivo antitumoral assay (dieren)
o Gevoelige cellen bij naakte immuundeficiëntie muizen inspuiten en verbinding toedienen
• In vitro kinase assay (enzyme)
o Kinase receptoren vaak belangrijk voor proliferatie
▪ Mutaties → constitutief actief of amplificatie (meer expressie) → continue
groeisignalen
▪ → Inhibitie receptoren om kanker tegen te gaan
1. Peptide in wells → + tyrosine kinase + ATP → fosforylatie peptide
2. + indicator met HRP (antilichaam gericht tegen gefosforyleerd peptide)
3. + TMB (substraat voor HRP) → blauwe kleur
4. Inhibitor toevoegen (inhibeert fosforylatie) → verschil in blauwe kleur meten
• In vitro kinase assay (reporter cell line)
1. Expressie tyrosinekinase receptor met klein deel B-galactosidase + fusieproteine SH2 met
groter deel B-galactosidase
2. Ligand bindt op receptor → autofosforylering van tyrosineresidus→ recrutering SH2
3. Actief B-Gal enzyme waar tyrosinekinase actief is
4. + lugal (bevat galactose) → galactose + D-luciferine (kleurloos)
5. + luciferase (reporter) → licht
6. Inhibitor toevoegen (inhibeert ligandbinding/fosforylatie) → verschil in intensiteit meten
o Intensiteit is proportioneel aan #actief B-Gal en dus aan kinase activiteit
o HTS (highthroughputscreening) om alles te versnellen en automatiseren
• In silico drug design (PC): ontwerpen op basis van receptorstructuur
Manieren van DD
• Fenotypische benadering (PDD)
o Empirische, “holistische” methode gebaseerd op observeerbare karakteristieken (read-
outs) van een organisme (cel, dier)
o Voordelen
▪ Target-agnostic, “target-unbiased” → geen kennis van patho-mechanistische
moleculaire details nodig
▪ Indien in vivo: indirect ook ADMET getest
o Nadelen
▪ Geen kennis van target → hoe structuur optimaliseren? (geen in silico mogelijk)
▪ In vivo: vaak “low throughput”
, • Target benadering (TDD)
o Rationale, “moleculaire” → gebaseerd op kennis van patho-mechanistische details
o Voordelen
▪ “high throughput” mogelijk
▪ MoAbs-benadering mogelijk
▪ Rationele methode (fundamenteel onderzoek)
o Nadelen
▪ Reductionistische benadering (je kijkt niet naar hele cel/proces dus target moet
gevalideerd zijn)
• Validatie: doelgerichte mutatie/inhibitie tegen genen, mRNA of proteïne
→ geen expressie proteïne → hoe verandert de cel?
• Vergelijking
• Zogezegd meer first-in class via PDD, maar biologics zijn ook target-based
• Snellere optimalisatie via TDD
• Nood aan mechanistisch onderbouwde PDD
• Bepalende factor voor PDD-succes: screening test voorspelt therapeutisch nut van
geselecteerd molecule (predictive validity) → goede chain of translatability nodig
o Goede chain of translatability als
▪ Gemeenschappelijke mechanistische basis bestaat tussen ziektemodel en
pathofysiologie
▪ Assay-endpoint (readout) en ziekte-indicator (klinisch) overeenstemmen
• Chain of translatability bij PDD
o Goed voor
▪ Infectieuze ziekten (bacteriën, virussen, parasieten)
▪ Duidelijk causaal verband tussen proteine en ziekte (bv. diabetes)
▪ Monogene ziekten (1 gen bv. mucoviscidose)
o Slecht voor
▪ Oncologie
▪ Neurowetenschappen
Verbeteren translatability
• Geen exogene stimulus (om echte situatie te simuleren)
o Niet helemaal waar want exogene stimuli hebben nut
o Antidepressiva worden getest op basis van sparteltijd van een muis → slechte simulatie
o Anti-epileptica worden getest op basis van shocks → slechte simulatie
• Gebruik van 3D-celsystemen en co-culturen → betere morfologische simulatie
• Gebruik van primaire (van patiënt) en pluripotente stamcellen (PSC, organoïden van patiënt)
o Huidige kankercellen worden al lang gebruikt → lijken ondertussen niet meer op originele
cel door genetische instabiliteit → slechte simulatie
• Moleculaire fenotypering (kan GM observeerbaar ziekte verbeteren in cel?)
o Cellulair: morfologie, proteïne aggregatie, glycogeen en lipide accumulatie, apoptose, ...
o Fysiologisch: elektrofysiologische read-outs, ....
o Moleculair: transcriptoom, proteoom, epigenetische markers, ...
• Zebravis als preklinisch model (gevalideerd voor fenflumarine (anti-epilepticum))
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur Nessie81. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €4,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
48756 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 15 ans