Resume
Samenvatting moleculaire biologie & DNA technologie- MLT2- Hogent
- Établissement
- Hogeschool Gent (HoGent)
Samenvatting + examenvragen uit de les met oplossing
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
Aperçu du contenu
Hoofdstuk 1: isolatie van nucleinezurenEX: Welk type binding is belangrijk bij pcr om deze 2 strengen uit elkaar te halen?
Waterstofbruggen
ALTIJD van 5’(fosfaat)3’ (OH groep)
RNA= reactiever, minder stabiel door 2’ OH groep
Hairpin
EX: TRNA kunnen herkennen
EX: In welke fase chromosoom?
Mitose-metafase
DNA ISOLATIE = isoleren (zuiveren) v DNA uit cellen
Nodig voor enzymatische ‘down stream’ toepasssing & werking verstoord bij onzuiver staal
HOE cellen openbreken voor DNA isolatie?
Lyse(buffer) afh van staaltype/celstructuur (versch voorbehandeling+ versch componenten)
‘pretreatment’ kan noodzakelijk zijn (voorbereidende stappen)
Plant&bacterie CELWAND (dier: celmembraan)
Gram+ dikkere wand dan -
- Chemisch (toevoegen v stof)
Detergent: SDS (sodium dodecyl sulfaat), maakt celmembraan kapot (vorming micel),
fosfolipiden uithalen (detergent&chaotrope stof = denatureren substraat = beter
voor enzym (proteinase k))
Alkalische buffer: NAOH
- Biologisch (enzym)
Proteinase K: breekt EW/nucleasen af, celmembraan + EW gebonden op NZ
Eigenschap: breed sprectrum, knipt na hydrofobe AZ
Nadeel: actief bij bep temp (50-70°C)
PH optimum = 8
Invloed = GROOT
Activiteit verhoogd bij aanwezigheid detergenten (SDS, Tween-20, Triton X 100) &
chaotrope stoffen (GuHCL, Guanidium-hydrochloride, ethanol, SDS, ureum,fenol,
mgcl2, guanidiumisothiocyanaat GuSCN)
Functie: EW denatureren+ nuclease onschadelijk maken (enzyme dat NZ afbreekt)
Chaotrope stoffen/zout: vorm EW valt uit elkaar, verhoogt entropie in bio systeem
door interferatie met zwakke intermoleculaire kracht (WB, vdwaalskracht, hydrofobe
effecten 2 hydrofobe mol. hebben aantrekking (aggregeren) dus moeten daar alle
H20 voor wegduwen, chaotroop inhibeert dit)
Effect op biomol. = zelfde als functie Proteinase K + verbreken watermantel DNA
(chaotroop trekt ook aan H2O en is sterker dus wint) + membraanpermeabiliteit
verhogen door verstoring hydrofoobeffect
, Lysozym: bacterie, hydroliseert peptidoglycaan (=maakt kapot) (bacteriele wand) +
breekt celwand van gram+ (Gr – heeft extra membr). Zit in traanvocht
- Fysisch (temp, druk, straling)
Warmte, osmose
- Mechanisch (beweging)
Vortex, soniceren
- Combinatie v versch methodes
Humane cel: proteinase K + detergent + warmte
Bacterie : NAOH + warmte
EX: Welke lading DNA ?
Negatief – (trekt H20 aan)
HOE zuiveren we DNA? Hoe verwijderen we overige celcomponenten?
Voordeel= sneller, gemakkelijker, beter bewaren, stabieler
Na cellyse, lysaat: DNA(zonder EW)/RNA in waterige opl, afbraakmateriaal v cel
(gedenatureerde EW, suikers), detergent, proteinase K, chaotroop
Versch opties:
- Phenol/chloroform extractie (vroeger)
Nadeel: schadelijke productie, duurt lang, moet heel nauwkeurig, isopropanol
precipatie
Voordeel: zeer zuiver dna, goede opbrengt
Versch fasen: waterig (DNA), interfase (celdebris), organische (proteinen EW, lipiden
VETTEN)
Isopropanol toevoegen, centrifuge, DNA slaat neer, bovenste vloeistof weg
- Boom extractie (nu) (kolomchromatografie)
Adsorptie van DNA op silicagel= silica-, samenstelling buffer: hoge zout conc &
chaotroop agens. zoutbrug+
Verwijderen contaminanten= wassen(ethanol & hoge zoutconc), flow through.
Elutie DNA (eluaat) = buffer: laag zoutconc, Tip: membraan goed drogen (GEEN
ethanol)
- Silica membraan technologie (gemakkelijk) voordeel: snel, minder schadelijk,
zuiver+geconcentreerd DNA, makkelijk te automatiseren.
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur emmahespeels. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €7,59. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
52510 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans