Resume

Samenvatting farmaceutische biotechnologie : detectie en zuivering van biotechnologisch aangemaakte eiwitten

0 fois vendu

Cours
Farmaceutische biotechnologie

Établissement
Universiteit Antwerpen (UA)

Dit is een samenvatting van het hoofdstuk detectie en zuivering van het vak farmaceutische biotechnologie.

[Montrer plus]

Aperçu 2 sur 14 pages

Voir l'exemple

Publié le 5 février 2024
Nombre de pages 14
Écrit en 2023/2024
Type Resume

Mertj Membre depuis 3 année 47 documents vendus

€4,99

Ajouter au panier

Ajouter au liste de veux

Garantie de satisfaction à 100%
Disponible immédiatement après paiement
En ligne et en PDF
Tu n'es attaché à rien

DEEL 2 : DETECTIE EN ZUIVERING VAN
BIOTECHNOLOGISCH AANGEMAAKTE EIWITTEN
1. Detectie van recombinante eiwitten
1.1. Detectie van eiwitten in oplossing
 Verscheidene colorimetrische en fluorimetrische methoden beschikbaar
(bv methoden van Lowry, Bradford, BCA (Pierce) en NanoOrange (Molecular Probes))

 Principe:
- Eiwitten binden op een min of meer aspecifieke manier aan een kleurstof of een
fluorescerende stof
- Bij binding veranderen de spectroscopische eigenschappen van deze stoffen
- Concentratie wordt bepaald aan de hand van een ijkingscurve (meestal goedkoop
eiwit zoals BSA [bovine serum albumine]).

Coomassie (Bradford) eiwitassay (heel veel toegepast)
 Beschreven door Marion Bradford in 1976
 Eiwitten (>3 kDa) binden op Coommassie G-250 in een
zure omgeving
→ spectrale shift van rood/bruin naar blauw
 Aminozuren of peptiden (moeten zekere grootte hebben)
binden niet op Coomassie G-250

 Voordelen
- Snel en eenvoudig
- Meting bij kamertemperatuur
- Compatibel met meeste zouten, solventen en buffers
 Nadelen :
- De assay produceert een niet-lineaire standaardcurve
- Binding van Coomassie G-250 met eiwit afhankelijk van
bepaalde basische aminozuren (vooral arginine) en
hydrofobe aminozuren
→ Aminozuursamenstelling van eiwit bepaalt concentratie-
absorptie curve
→ Geschikte standaard gebruiken (ong zelfde AZ als je eiwit)
- Niet compatibel met detergenten (precipitatie van Coomassie G-250)
- Sommige eiwitten weinig oplosbaar in zure Coomassie G250 reagens
- Methode niet erg gevoelig (Range: 100-1500 µg/ml)

Bicinchoninic acid (BCA) eiwitassay (2e klassieker die men vaak toepast)
 Beschreven door Paul K Smith in 1985
 Principe:
- Reductie van Cu2+ naar Cu1+ door eiwit in een alkalisch milieu
- Interactie van Cu1+ met 2 BCA moleculen tot een purper-gekleurd BCA-Cu 1+ complex
- Meting bij bepaalde golflengte

,  Voordelen BCA assay
- Compatibel met meeste detergenten (tot 5%)
- Beter lineair bereik ivm Bradford
- Eiwit-tot-eiwit variatie vs kleurvorming relatief laag
- Hogere gevoeligheid ivm Bradford Range: 20-2000 µg/ml
 Nadelen BCA assay
- Substanties die koper reduceren: produceren kleur in BCA assay
- Reagentia die koper cheleren (wegvangen) : inhiberen kleurreactie
- Sommige vrije aminozuren produceren kleur in BCA assay
- Reactie niet bij kamertemperatuur (37°C, 30 min).
Incubaties bij temperaturen >37°C (bv. 60°C, 30 min) geven hogere gevoeligheid (5-
250 µg/ml)

In sommige eiwitbepalingen : modificatie van een specifieke functionele groep van de eiwitten
(meestal primaire aminogroepen van de lysine zijketens en de N-terminus)
Voorbeeld : fluorescamine methode
 Het adduct is fluorescerend, het reagens niet
 De overmaat aan reagens hydrolyseert snel in water tot niet fluorescerende
eindproducten
 Enkel toepasbaar in buffers die geen primaire amines bevatten
 Methode ook gebruikt om het aantal aminogroepen te bepalen in oplossing

1.2. SDS polyacrylamide gelelektroforese
 Doel : eiwitten scheiden volgens hun grootte door een elektrische spanning aan te leggen
tussen de uiteinden van de gel
 2 mogelijkheden
- Scheiding onder natieve condities: netto lading en de massa van het natieve eiwit
bepaalt op welke plaats het zal migreren
- Scheiding onder denaturerende condities: SDS polyacrylamide gelelectroforese
 Toepassingen
- Beoordeling van de zuiverheid van een eiwitpreparaat
- Bepaling van het molecuulgewicht van een eiwit
- Nagaan van eiwitdegradatie

SDS polyacrylamide gelelektroforse : eiwitten worden opgenomen in een buffer met
volgende componenten :
 Een reducerend agens (β-mercaptoethanol of dithiothreitol)
- Reduceert S-S verbindingen
 Een denaturerend agens (SDS = sodium dodecyl sulphate)
- SDS = anionisch detergent
- Bindt met eiwitten in een stoechiometrische verhouding van 1,4 g SDS/g eiwit
→ Eiwitten worden negatief geladen staafjes
- Negatieve lading afkomstig van sulfaatgroep van SDS
- In een SDS-gel zullen alle eiwitten dus naar de positieve elektrode migreren

Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:

Qualité garantie par les avis des clients

Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.

L’achat facile et rapide

Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.

Focus sur l’essentiel

Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.

Foire aux questions

Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?

Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.

Garantie de remboursement : comment ça marche ?

Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.

Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?

Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur Mertj. Stuvia facilite les paiements au vendeur.

Est-ce que j'aurai un abonnement?

Non, vous n'achetez ce résumé que pour €4,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.

Peut-on faire confiance à Stuvia ?

4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)

67479 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours

Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 15 ans

Commencez à vendre!

Récemment vu par vous

Examen ·

(0)

Resume

Samenvatting farmaceutische biotechnologie : detectie en zuivering van biotechnologisch aangemaakte eiwitten

Infos sur le Document

Sujets

École, étude et sujet

Vendeur

Avis reçus

Aperçu du contenu