Examen
EXAMENVRAGEN + OPLOSSINGEN GIP
- Établissement
- Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
Geen tijd om te leren voor dit vak? Geen probleem, leer deze vragen en je bent gegarandeerd erdoor!
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
Aperçu du contenu
Examenvragen + oplossing GIPBespreek de belangrijkste kenmerken van het pUC19 plasmide (tekening plasmide gegeven) + hoe
weten we dat de transformatie van competente E.coli cellen met dit plasmide gelukt is? + wat verstaan
we onder blauw/wit selectie bij klonering in het plasmide? (5 punten)
(handleiding p30)
pUC19:
Belangrijkste elementen:
1. ORI: startsite replicate plasmide
2. AmpR: beta-lactamase breekt beta-lactamring van Amp (agar) af -> geen functioneel Amp
3. LacZalfa: N-terminus van LacZ gen = reportergen
Tranformatie LacZalfa gen in bacterie met lacZbeta deel -> volledig LacZ gen -> functioneel
beta-galactosidase. IPTG induceert de lac promotor voor aanmaak beta-galactosidase, leaky
expression kan plaatsvinden.
X-gal wordt afgebroken door beta-gelactosidase -> blauw precipitaat
Transformatie gelukt? Bacterie groeit op agar met Amp, witte kolonies op agar zonder X-gal, blauwe
kolonies op agar met X-gal
Blauw/wit selectie: MCS met aantal restrictie sites aan het begin van LacZ gen. Insertie van een ander
gen in LacZ mbv. restrictie digestie -> niet-functioneel beta-galactosidase -> X-gal wordt niet
afgebroken -> witte kolonies waar transformatie heeft plaatsgevonden (enkel bij pUC19)
,bespreek de belangrijkste kenmerken van het pGLO plasmide (tekening van plasmide wordt gegeven
+ ook afbeelding van de werking van het ara operon) + Hoe weten we dat de transformatie van
competente E. coli cellen met dit plasmide gelukt is? + bespreek de rol van het ara operon in de
expressie van GFPuv
(handleiding p31)
pGLO:
Belangrijkste elementen:
1. ORI: = origin of replication
2. AmpR-gen: codeert voor B-lactamase. Dit breekt de B-lactamring van ampicilline af, waardoor
ampicilline zijn werking verliest.
3. GFPuv-gen: fluorescerend groen onder UV-licht = reportergen, wordt afgeschreven na PBAD
promotor
4. PBAD: induceerbare promotor voor het GPVuv gen
5. araC: codeert voor AraC proteïne = repressor PBAD, RNAP zal niet kunnen binden op PBAD
Arabinose bindt AraC -> conformatieverandering AraC -> bindingsplaats voor RNAP op DNA
komt vrij -> GFPuv wordt afgeschreven
Transformatie gelukt? Bacterie groeit op agar met Amp, witte kolonies op agar zonder arabinose,
groene kolonies onder UV-licht op agar met arabinose.
, oefening zuiverheid DNA: absorbantie bij 260 en 280 nm gegeven en DNA/RNA bepalen en
concentratie nucleïnezuren (er zijn geen proteïnen in het mengsel aanwezig)
(handleiding p40-41)
a260/a280
~1,8 -> zuiver DNA
~2 -> zuiver RNA
Als verhouding lager is -> aanwezigheid van contaminanten die sterk absorberen bij 280 nm
Als er geen proteine zijn kunt ge dees ni gebruiken
%P + %N = 100
Voor 1 mg/ml DNA: a260,n=20 en a280,n=10
Voor 1 mg/ml eiwitten: a260,p=0,57 en a280,p=1
-> 2 vergelijkingen en 2 onbekenden
(%= 1g/100ml)
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur Sciencestudent123. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €2,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
56326 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans