Samenvatting cytologie
cel II (LM)
1. Lichtmicroscopie
1.1 Overzicht
Resolutie: 200 nm (= kleinste afstand waarmee 2 punten nog
net gescheiden worden weergegeven) bepaald door:
o Objectief
o Golflengte van zichtbaar licht
Effectieve resolutie mede bepaald door natuur preparaat:
o Gefixeerd en gekleurd (hematoxyline/eosine)
o Levend met doorgaans te weinig contrast
Vergroting: product van oculair (10x) en objectieflens (4,10, 40,
100x) -> max. 1000x vergroten
1.2 Opstelling (Klaar-veld)
Meeste preparaten worden in LM bekeken met doorvallend wit licht
Bestaat uit 3 lenssystemen:
Condensor: bundelt het doorvallend licht op preparaat
Bepalen: lichtsterkte,
Objectief: kijkt met zeer korte werkafstanden naar preparaat (vergroot beeld)
resolutie, kwaliteit
Oculair: beeld navergroten en op retina projecteren
+
Verstelbare tafel
Prisma: lichtweg buigen voor comf zitpositie
1.3 Speciale lichtmicroscopen voor levende cellen
Fasecontrastmicroscopie
o Basis van faseverschuiving van licht
o Kleine faseveranderingen, ontstaan door brekingsverschillen in preparaat ->
amplitudeveranderingen (licht/donker)
o Toegepast op ongekleurde preparaten (gekweekte levende cellen of vriescoupes)
Differentieel interferentie-contrastmicroscopie (DIC / Nomarski)
o Basis van +/- interferentie van gepolariseerd licht
o 3D beeld levende cellen
Digitale microscopie
o Computerverwerking van beelden met ultragevoelige videocamera’s
o Dynamisch
Donkerveldmicroscopie
o Kleine objecten (bacteriën, organellen)
(fluorescentie)microscopen
o Zie verder
o Life cell imaging
, 1.4 principes lichtmicroscopie
Contrast verhogen
o Met kleuring:
Histologische kleuring: reduceert amplitude van bep. λ -> kleuring
o Zonder kleuring:
Verschillen in optische dichtheid -> beeldcontrast
Afwijkende brekingsindex -> faseverschuiving
Interferentie (+/-): zwart-wit beeld
1.5 voorbeeld lichtmicroscopische analyse
Kleuring darmvillus met
PAS (Periodic Acid Shiff) -> vrije suikers
Hematoxyline -> nucleïnezuren
Eosine -> NH2 groepen van EW
1.6 Fluorescentiemicroscopie
Epi-illuminaite = meest gebruikte illuminatiesysteem
Objectieflens + condensor + objectief in 1
Epifluorescentie
Activeert met excitatielicht van korte λ (ultraviolet-blauw, groen)
Fluorchrome stof in preparaat zendt emissielicht uit van langere λ (resp. groen, rood-
infrarood)
Conventioneel (met kwikdamplamp als lichtbron)
Confocale laser scanning microscopie (CLSM) (met laser als lichtbron)
1.6.1 Principes:
1. Excitatiebron: Hg of Xe lamp
2. λ – filters in een filterkubus:
Excitatiefilter
Dichroïsche spiegel (beamsplitter)
Emissiefilter of stopfilter
3. Detector: ogen of camera
fluorocroom: bv. alexa 488 (liefst aanslaan met λ 488 nm, mr je kan niet 1 λ doorlaten (je laat
bv enkel 450 tot 550 nm door), vervolgens 2 e filter: laat enkel licht toe van > 515nm alexa 488
w zichtbaar
1.6.2 Gebruik:
Aankleuren en kwantificeren
o Ion-gevoelige kleurstoffen: fluorchroom reageert met ion, kleur op basis van
concentratie ion (bv fura-2 met Ca2+ )
o Immunofluorescentie: EW detecteren mbv Ig’s gebonden aan fluorchroom
o Tagging van EW met fluorescente EW (spec EW in levende cellen detecteren)
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur StudentjeGeneeskunde1. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €3,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
