Samenvatting Moleculaire en biochemische technieken Course 5
0 vue 0 fois vendu
Cours
Moleculaire en biochemische technieken
Établissement
Hogeschool Arnhem En Nijmegen (HAN)
Samenvatting met aantekeningen uit de les. Vectoren zijn beschreven. Componenten PCR reactie zijn beschreven. Sequencing is beschreven. Volledige samenvatting nodige informatie start praktijk.
cDNA is DNA zonder intronen. Van mRNA naar DNA: reverse transcriptase
PCR mastermix: DNA template, PCR primers fw en rv, DNA polymerase, dNTP’s, PCR reactie buffer en
MgCl2.
PCR reactiebuffer, stabiliseert de pH. MgCl2 magnesium ionen zijn een cofactor voor DNA polymerase.
Denaturatie: DNA splitsen in twee enkele strengen. Hoge temperatuur 98°C.
Annealing: primers hechten aan DNA streng. Meestal tussen de 50°C en 60°C graden, afhankelijk van
primers.
Elongatie: Taq polymerase zet dNTP’s aan primer. 72°C afhankelijk van de DNA polymerase soort.
Taq DNA polymerase, hoge kwaliteit geen proofreading
Pfu DNA polymerase, wel proofreading
Phusion High Fidelity DNA polymerase, hogere kwaliteit dan Pfu maar erg duur
Forward primer heeft een elongatie naar rechts, reverse primer heeft een elongatie naar links. Onderste
streng is altijd complementair aan de bovenste streng. Primers zijn complementair aan de streng waar
deze aan moet binden.
Primer is tussen de 18 en 24 bp lang, CG content is 50%-60%, 3’ end moet een C of G zijn, niet
complementair binnen de sequentie, niet complementair aan zichzelf of aan elkaar (min. 3bp), afstand
niet langer dan 1-2 kb lang en Ta geen groter verschil dan 5°C.
Achter het start-codon (ATG) en voor het stop-codon (TGA,TAA,TAG).
Taq 60 seconden per 1000 nucleotides.
MOLECULAIRE EN BIOCHEMISCHE TECHNIEKEN 16/09/24
Lacl gen codeert voor het lac repressor eiwit.
AmpR codeert voor beta-lactamase (ampicilline resistentie).
GST codeert voor glutathione S tranferase.
In de pGEX-4T-1 vector is de tac promotor voor de IDH1 sequentie die m.b.v. de MCS (multiple cloning
site) in de vector is geplaatst. Deze vector gevat in de MCS een stopcodon. De ampicilline resistentie is
belangrijk zodat de bacterie de vector niet uit de cel gooit. Tijdens het kloneren van de IDH1 sequentie
wordt het GST eiwit meegenomen, zo wordt dit het GST-IDH1 eiwit. GST wordt gebruikt voor de zuivering
van het eiwit. Deze vector bevat tevens het lac operon.
De pET-15b vector bevat de T7 promotor, het lac operon en een ampicilline resistentie. Deze vector heeft
geen GST, maar 6x HIS. Hierdoor wordt het IDH1 eiwit het his-IDH1 eiwit. 6x his wordt gebruikt om het
eiwit te kunnen isoleren. Deze heeft geen stopcodon maar een T7 terminator.
De pBAD/His vector bevat de pBAD promotor, het araC operon, en een ampicilline resistentie. Deze
vector heeft geen GST, maar 6x HIS. Hierdoor wordt het IDH1 eiwit het his-IDH1 eiwit. 6x his wordt
gebruikt om het eiwit te kunnen isoleren. Deze heeft geen stopcodon maar een pBAD terminator.
Pagina 10 van 17
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur ebeltman21. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €4,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
