Dit is een samenvatting van het vak Gentechnologie gevolgd op AP hogeschool. Het vak werd gegeven door de lector Mevr. Pittois. De samenvatting is opgesteld met behulp van de ppt slides en notities van in de lessen. Ook zijn potentiele examenvragen inbegrepen in de samenvatting.
Abstract
Dit is een samenvatting gemaakt van de ppt slides en notities gemaakt in de
les.
Ook worden er examenvragen in weergegeven.
Lauren Donche
,Hoofdstuk 1: Enzymen uit de
recombinante DNA technologie
HERHALING ENZYMEN:
- Endonucleasen
- Exonucleasen
- Ligasen
- Fosfatasen en kinasen
- DNA polymerasen
- Reverse transcriptase
- Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)
- Topoisomerasen
- Recombinasen
Endonucleasen
= enzymen die DNA en RNA cellen bewerkt door fosfodiësterbindingen te breken
tussen nucleotiden gelegen binnenin de keten.
Voorbeeld: restrictie-endonucleasen
Deze enzymen zijn bijzonder omdat ze specifieke, korte DNA-sequenties (meestal
palindromen) herkennen en precies op die locaties het DNA knippen. Het zijn dus
een soort restrictie-enzymen.
Restrictie-enzymen worden door bacteriën gebruikt om vreemd DNA, zoals dat
van bacteriofagen (virussen), in stukken te knippen en zo te vernietigen. Omdat
DNA universeel is en zowel bacteriën als andere organismen, zoals mensen,
dezelfde basen gebruiken, zouden deze enzymen theoretisch ook het bacteriële
eigen DNA kunnen knippen. Om dit te voorkomen, markeren bacteriën hun eigen
DNA door specifieke plaatsen te methyleren, wat betekent dat er methylgroepen
aan het DNA worden toegevoegd. Deze methylering zorgt ervoor dat het eigen
DNA onherkenbaar wordt voor de restrictie-enzymen, waardoor het beschermd
blijft tegen afbraak. Hierdoor kunnen bacteriën onderscheid maken tussen eigen
en vreemd DNA en hun afweermechanisme effectief gebruiken zonder zichzelf te
beschadigen.
Pagina 1 van 60
,Een schoolvoorbeeld van een soort restrictie-enzym of anders gezegd restrictie-
endonuclease is EcoRI, deze is afkomstig van E.coli.
Dit enzym herkent de sequentie GAATTC (in beide strengen van dsDNA), en knipt
ter hoogte van deze sequentie. Beide strengen worden gekliefd. Omdat de knip
asymmetrisch gepositioneerd is in de herkenningssequentie, ontstaan twee
fragmenten met een 5’ overhang.
Naamgeving restrictie-endonucleasen:
EcoRI BamHI
E = genus Escherichia B = genus Bacillus
co = soort coli am = soort amylolique
faciens
R = stam RY13 H = stam H
I = 1ste geïsoleerde endonuclease I = 1ste geïsoleerde
endonuclease
Verschillende klassen:
Klasse 1 Klasse 2 Klasse 3
- Herkennen specifieke - Herkennen specifieke - Kenmerken van beide
sequenties sequenties types (I en II)
- Knippen ~ 1000-5000 - Knippen beide - Knippen beide
Pagina 2 van 60
, basen verder strengen van het strengen op een
-
Knippen stuk (~75) DNA, dicht bij zekere afstand van de
eruit herkenningssite herkenningssite
- Tweede molecule van - Co-factor: Mg 2+
- Co-factoren: Mg2+ en
het RE nodig om 2de ATP
streng te knippen
- Co-factoren: Mg2+,
ATP en SAM (S-
adenosyl methionine)
Weet dat er in de gentechnologie vooral wordt gewerkt met klasse II restrictie-
enzymen:
- De nuclease en methylase zijn hierbij apart
- Ze herkennen de sequentie en knippen erin dit kan twee verschillende
uitkomsten geven:
o Sticky ends (overhangende eindes)
o Blunt ends (rechte eindes)
- Ze knippen minimum 4bp
De knipplaatsen worden weergegeven tot op de nt
volgens de IUPAC code. De te kennen codes zijn
aangeduid met een rood kader op de afbeelding
hiernaast.
Verschil sticky-ends en blunt-ends:
Sticky ends zijn de uiteinden van een DNA-streng die een overhang (of "sticky"
gedeelte) hebben, oftewel een ongebonden enkele streng van nucleotiden.
Deze worden nog verder onderverdeeld in:
- 5’ overhang: overhang aan 5’
- 3’ overhang: overhang aan 3’
Blunt ends zijn de uiteinden van een DNA-streng waar de knip recht door de
dubbele helix is gegaan, zonder enige overhang van enkele basenparen.
Chimere constructies:
Pagina 3 van 60
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur lautjeD. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €9,46. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
