Een samenvatting van hoofdstuk 21: 'moleculaire biologie technieken voor celbiologie' uit het vak celbiologie 1 in de eerste bachelor geneeskunde aan de KU Leuven.
21: moleculaire biologische technieken in de celbiologie
Celbiologie I: hoofdstuk 21 moleculaire biologische
technieken in de celbiologie
Analyseren en manipuleren van DNA
Gelelektroforese van DNA
DNA fragmenten worden op lengte gescheiden door invloed van elektrisch veld
DNA is negatief dus zal naar de negatieve pool bewegen
Klein DNA zal sneller migreren dan grote stukken
Gebeurt in agarose of polyacrylamide gel
DNA ladder (gekende lengtes) toegevoegd ter vergelijking
Restrictie endonucleasen (restrictie enzymen = RE)
Geïsoleerd uit bacteriën
Herkennen specifieke DNA sequenties die dikwijls palindroom zijn
Knippen op die plaats in dsDNA in beide strengen
Blunt ends wanneer beide strengen op dezelfde plaats worden geknipt
Sticky ends wanneer de strengen niet op dezelfde plaats worden geknipt
5’ of 3’ overhangende uiteinden
Verdedigingsmechanisme tegen bacteriofagen
RE zullen het viraal DNA knippen (knipt niet in eigen DNA omdat dat
gemethyleerd is
Restrictie mapping
DNA fragment wordt geknipt door verschillende RE en daarna gescheiden
Men weet nu waar welk RE knipt
Soms puzzelen omdat RE in het begin en het einde van DNA streng kunnen
knippen
RE gebruikt om te kijken of er delen gemethyleerd zijn wordt niet geknipt
Southern blot analyse
DNA wordt geknipt door RE, enkelstrengig gemaakt en gescheiden door
elektroforese
Op de gel wordt een membraan gelegd waardoor het DNA transfereert naar het
membraan
Via capillaire transfer
Een bakje met transfer buffer, glazen plaat daarop met een absorberend papier
dat langs 2 kant in de buffer hangt
Op het papier ligt de gel met daarop het membraan en nog een papier
De buffer zal door capillariteit door de gel worden gezogen en het DNA op
het membraan achterlaten
Recombinant DNA technologie
2 DNAs worden door dezelfde RE geknipt sticky ends
De 2 strengen binden met elkaar wat zorgt voor nieuw samengesteld DNA
Kloneringsvectoren
, 21: moleculaire biologische technieken in de celbiologie
Bacteriële plasmiden (ds circulair DNA)
RE knippen in plasmide en in DNA identieke sticky ends
DNA bindt aan plasmide DNA wordt door bacterie tot uiting gebracht
DNA wordt in reporter gen ingebracht waardoor het niet meer tot
expressie komt reporter gen wel tot expressie = geen DNA insert
Verschillende stukken DNA worden in plasmide ingebracht (transformatie)
Filteren door:
Bacteriën zonder plasmide sterven door antibioticum
Als receptor gen tot uiting komt geen insert DNA dus verwijderd
Overblijvende bacteriën worden geïsoleerd en plasmide eruit gehaald
Plasmide wordt geanalyseerd door bv. restrictie mapping of
sequencing
Bacteriofagen (ds lineair DNA)
DNA dat niet noodzakelijk is voor replicatie wordt uitgeschakeld
DNA wordt vervangen door vreemd DNA
Cosmids (circulair/lineair dsDNA)
BACs (ds circulair DNA)
YACs (ds lineair DNA)
Genomische bibliotheek
Genomisch DNA wordt geïsoleerd en geknipt met RE
Stukken worden geligeerd in kloneringsvector daarna in gist of E. Coli gebracht
Verschillende stukken DNA zitten verspreid over kloneringsvectoren
Elke kolonie brengt eigen stuk DNA tot uiting
Kolonie hybridisatie
Membraan wordt op petrischaal met kolonies gelegd
Kolonies binden aan membraan en worden geliseerd en DNA gedenatureerd
Probe van gezocht DNA bindt aan complementaire streng in kolonies met dat
DNA
Kolonies waar het probe bindt worden geïsoleerd en opgekweekt
Plasmiden worden geïsoleerd en sequentiebepaling wordt gedaan
cDNA bibliotheek
Primer wordt op mRNA gebonden en daar wordt nieuwe DNA streng opgebouwd
door reverse transcriptase
RNAse H verwijdert mRNA streng en nieuwe DNA streng wordt gebouwd
cDNA bibliotheek bevat enkel DNA van genen die tot expressie komen
DNA sequentiebepaling
Sanger dideoxy methode
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur guillaumehermans. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €2,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
