Resume
Samenvatting scheidingstechieken en eiwitzuivering
- Établissement
- Hogeschool Gent (HoGent)
Dit is samenvatting van het vak scheidingstechieken, bij FBT 2, hierin staat alle nuttige info voor het examen goed in uitgelegd.
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
Aperçu du contenu
Samenvatting scheidingstechnieken en eiwitzuiveringHoofdstuk 1: Inleidende begrippen................................................................................2
1.1 Soorten scheidingstechnieken..............................................................................2
1.2 Chromatografie.....................................................................................................2
Hoofdstuk 2: Uitwisselingsprincipes..............................................................................6
2.1 Adsorptiechromatografie......................................................................................6
2.2 Verdelingschromatografie....................................................................................7
2.3 Ionenuitwisselingschromatografie......................................................................10
2.4 Affiniteitschromatografie....................................................................................15
2.5 Gelfiltratiechromatografie..................................................................................18
2.6 Hydrofobe interactiechromatografie..................................................................20
Hoofstuk 3: Staalvoorbereiding...................................................................................23
3.1 Staal voorbereiden op extractie.........................................................................24
3.2 Extractie.............................................................................................................24
3.3 Derivatisatie.......................................................................................................27
3.4 Standaardisatie...................................................................................................29
3.5 Staalvoorbereiding voor eiwitopzuivering..........................................................31
Hoofstuk 4: Chromatografie.........................................................................................34
4.1 Papierchromatografie.........................................................................................34
4.2 Dunnelaagchromatografie..................................................................................34
4.3 Theoretische aspecten van verdelingschromatografie......................................39
4.4 Kolomchromatografie.........................................................................................42
4.4.2 Gaschromatografie.......................................................................................44
4.4.3 Vloeistofchromatografie...............................................................................50
Hoofstuk 5: detectiemethoden....................................................................................59
Hoofstuk 6: methode-validatie.....................................................................................61
1
, Hoofdstuk 1: Inleidende begrippen
1.1 Soorten scheidingstechnieken
- scheidingstechnieken met scheidingsprincipe waarop ze gebaseerd zijn
Filtratie: verschil in deeltjesgrootte
Extractie: verschil in oplosbaarheid
Destillatie: verschil in kookpunt
Indampen: verschil in kookpunt
Centrifugeren/decanteren: verschil in massadichtheid
Elektroforese: verschillen in elektroforetische mobiliteit van deeltjes
- Chromatografie veelzijdige en krachtige scheidingstechniek die verdere
identificatie en kwantificatie van hele reeks belangrijke componenten mogelijk
maakt
de scheiding van de componenten gebaseerd op hun verschil in
oplosbaarheid, grootte, polariteit, adsorptie of vluchtigheid
- preparatief
isolatie van doelwitcomponent of analyt
Recuperatie doelwitcomponent in zuivere vorm
Vb zuivere aspirine uit ruw reactiemengsel
Vaak met grote hoeveelheden
- Analytisch
Enkel informatie over doelwitcomponent: kwalitatief en kwantitatief
Geen recuperatie van doelwitcomponent
Vb geneesmiddelen in bloed
Vaak met heel kleine hoeveelheden
- scheidingstechniek methode om zuivere verbindingen te verkrijgen uit
mengsel van stoffen
Zuivere verbindingen = doelwitcomponenten = analyten
1.2 Chromatografie
- Chromatografie
Scheidingstechniek die gebruik maakt van 2 niet-mengbare fasen:
Mobiele Fase (MF): gas of vloeistof die voortbeweegt
(mengsel van) polaire of apolaire solventen
Gas: N2, H2
Stationaire Fase (SF): vaste stof of vloeistof die stilstaat
Silicagel (polaire fase)
Gemodificeerde silicagel (apolaire fase)
Drager met daarop gebonden groepen: enzymstubstraten,
antilichamen, …
Drager met poriën van bepaalde grootte
Vloeistof
- Werking:
2
, Mengsel (staal) oplossen en op stationaire fase brengen
Mobiele Fase stroomt langs/doorheen SF
interactie tussen componenten van het staal en de SF én MF
enkel als component in MF migreert component stroomt mee
Componenten met verschillende wisselwerking met SF en MF zullen
met verschillende snelheid migreren
scheiding van componenten
- Doelstelling chromatografie
scheiden van mengsel in zijn individuele componenten (+
detectiesysteem)
kwalitatieve en/of kwantitatieve bepaling van opgezuiverde
verbinding(en)
= analytische chromatografie
opgezuiverde verbinding(en) te isoleren
= preparatieve chromatografie
- Dunnelaagchromatografie DLC/ TLC
stationaire fase
meestal vaste fase silicagel en aluminiumoxide
vloeibare fase cellulosepoeder met waterlaag
dunne laag op vlakke glas-, aluminium- of kunststofplaat
mobiele fase eluens
organisch solvent of mengsel van solventen
mobiele fase beweegt door capillaire krachten over stationaire
fase
figuur:
oplossing van mengsel met 2 componenten
rood en blauw gespot op dunnelaagplaat
in ontwikkelingskamer verzadigd met eluens
geplaatst
eluens migreert langs dunnelaagplaat door capillaire krachten
blauw grotere affiniteit voor staionaire fase sterker
vastgehouden dan rood
Rood sneller bewegen mengsel gescheiden
Retentiefactor Rf
ratio to front verhouding van loopafstand van
component ten opzichte van loopafstand van
mobiele fase
retentiefactor tussen 0 en 1
Hoe minder affiniteit component heeft voor SF, hoe
verder analyt in bepaalde tijd migreert op plaat hoe groter
retentiefactor is
- Kolomchromatografie
kolommen buisjes gevuld met stationaire fase
waardoor mobiele fase stroomt
passage van mobiele fase doorheen kolom elutie
mobiele fase eluens of eluent
mobiele fase na chromatografische scheiding kolom
verlaateluaat
3
, figuur
oplossing van mengsel met 2
componenten rood en blauw,
aangebracht bovenop kolom
verbindingen rood en blauw
verschillende affiniteit voor stationaire-
en/ of mobiele fase migreren met verschillende snelheid in
kolom
Vers eluent steeds opnieuw aangebracht bovenop kolom
waardoor mengsel verder migreert
blauw sterker vastgehouden door vaste fase dan component
rood blauw zal minder tijd in mobiele fase doorbrengen dan
rood
blauw trager doorheen kolom bewegen dan rood pas
onderaan kolom nadat rood is geëlueerd mengsel gescheiden
concentratie van componenten
in functie van afstand afgelegd in kolom
op vier verschillende tijdstippen
Pas op tijdstip (d) zijn componenten
volledig van elkaar gescheiden
stoffen die grotere afstand afleggen
vergroot bandbreedte waar component zicht bevindt
- Chromatogram
chromatogram verband tussen detectorsignaal en tijd die verloopt
vanaf start van scheiding
plaats van piek in chromatogram aanwijzing over aard van stof
oppervlak van piek hoeveelheid stof
basis daarvan kan kwalitatieve en kwantitatieve analyse plaatsvinden
Uit chromatogram belangrijke parameters:
dode tijd = mobiele tijd = tm = t0 = holdup time
tijd die onvertraagde component in mobiele fase nodig
heeft om door kolom te stromen
tijd die mobiele fase nodig heeft om door de kolom te
stromen
Retentietijd tr
tijd die verloopt tussen begin van scheiding (injectie van
staal) en verschijnen van piekmaximum
mobiele fase met constante snelheid u door kolom
stroomt retentievolume Vr = tr . u
baseline width, w
breedte van piek gemeten aan basis,
bepaald door hellingen van piek te extrapolleren tot
basislijn
oppervlakte onder piek = piekoppervlakte, AUC, area under the
curve = peak area,
Hoeveelheid stof
resolutie; Rs
tussen twee pieken mate waarin stoffen gescheiden
worden gedurende looptijd
resolutie tussen twee pieken berekend door verschil in
retentietijd te delen door gemiddelde breedte van twee
pieken aan basis:
4
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur emmavp2003. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €7,16. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
56880 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 15 ans