Doel: biopsiefragmenten onderzoeken + cel/weefsel structuren
onderscheiden
Techniek: chemische bestanddelen (EW, V, KH, Z) vastleggen
+ morfologische cellulaire structuren behouden
Effecten:
Preventie van autolyse + putrefactie
- autolyse = afbraak van cellen door enzymen -> tgv lysosomen
- putrefactie = afbraak van weefsels door bacteriële activiteit
-> gepaard met gasformatie
Behouden van cellen/weefsel bestanddelen in zo getrouw mogelijke
toestand
Harden van weefsels
Brekingsindex stijgt
Meer selectieve kleuring
Soorten fixatieven:
Formaldehyde
-> meest gebruikte fixatief
-> gas, oplosbaar in water (40% van zijn gewicht)
-> commercieel verkrijgbaar als formol (40% formaldehyde)
-> meestal 10% formoloplossing (4% formaldehyde)
-> geïncorporeerd in vele andere fixatieven
-> fosfaatbuffer aan toevoegen om oxidatie tegen te gaan
(anders verzuring met vorming van storend formolpigment)
Ethylalcohol (C2H5OH)
-> weinig nut (enkel bloeduitstrijkjes)
-> penetreert traag, verharding duurt lang
-> + andere reagentia (Carnoy’s vloeistof) -> fixatie sneller
-> effecten: - denaturatie eiwitten
- precipatie glycogeen
- lost vetten op
Aceton
-> werking analoog aan ethylalcohol (glycogeen niet goed bewaard)
-> niet meer routinematig gebruikt
Alcoholisch formol
-> bestaat uit: formol + 90% alcohol
-> soms gebruikt voor fixatie KH -> fixatie volledig na 6-8 uur
Carnoy’s vloeistof
-> bestaat uit: 100 % alcohol + chloroform + azijnzuur
-> snelle penetratie, goede kernfixatie met bewaring RER en
glycogeen
-> veroorzaakt belangrijke krimping + vernietigt meeste
cytoplasmatische
elementen
-> fixatie volledig in 1-2 uur (kleine fragmenten al na 15 min)
, 2 Inbedding
Na fixatie moet weefsel verhard worden om te kunnen snijden
soorten inbeddingsmiddelen:
o Inbedding en impregnatie met gelatine (ideaal voor bot)
o Inbedding en impregnatie met paraffine (meeste)
o Inbedding in plasticsoorten (harsen)
Paraffine inbedding:
Stap 1: dehydratatie
-> water wordt uit weefselfragmenten gehaald via alcohol reeks
-> alcohol reeks bestaat uit: serie baden met stijgende alcoholconc.
Stap 2: clearing
-> alcohol en paraffine niet mengbaar dus intermediaire vloeistof
gebruiken die
wel mengbaar is met beide -> ethanol wordt vervangen door
deze 3de vloeistof
(dan wordt het transparant)
-> soorten clearingmiddelen:
- chloroform: duurt te lang
- benzeen: zeer toxisch
- tolueen en xyleen: enkel nog gebruikt voor immunokleuring
-> kleine fragmenten klaar in 30-60 min / grote fragmenten: 2-
4 uur
- NEOCLEAR: vervangmiddel tolueen en xyleen (nu meest
gebruikt)
Stap 3: impregnatie met vloeibaar paraffine
-> paraffine verwarmen tot enkele graden boven smeltpunt (60°C)
-> weefsel wordt hier dan ingebracht
-> door de warmte verdampt neoclear en wordt progressief
vervangen door
vloeibare paraffine
Stap 4: inbedding
manueel:
-> geïmpregneerde weefselfragmenten in blokken gieten
-> weefselstuk met te snijden opp. op bodem van vorm leggen
-> overgieten met vloeibare paraffine
-> snel afkoelen om kristallisatie te voorkomen
-> na harding vorm verwijderen -> klaar om gesneden te worden
paraffinedispensor:
-> geïmpregneerde weefsel in metalen kuipje plaatsen (60°C)
-> door druk op knop: gekende hoeveelheid paraffine bedekt
weefsel
-> metalen kuipje op koelplaat -> paraffine kan inkrimpen
-> blokje kan gedemouleerd worden
3 Snijden van weefsels
Type instrumenten:
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur amyvanhorenbeeck11. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €5,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.