Resume
Samenvatting - Moleculaire biologie en DNA technologie
- Établissement
- Hogeschool Gent (HoGent)
Volledige samenvatting van Moleculaire biologie en DNA technologie. 50 pagina's
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
Aperçu du contenu
Samenvatting Moleculaire biologie en DNA technologieHoofdstuk 1: Isolatie van nucleïnezuren
1.1 Nucleïnezuren
DNA en RNA
Structuur van DNA:
5’ vrije fosfaatgroep
3’ vrije OH-groep
Antiparallelle strengen
Waterstofbruggen
Bewaren genetische informatie
Structuur van RNA:
Veel lagere stabiliteit dan DNA
Snelle turnover -> reguleerbaar
Enkelstrengig
Interacties met eiwitten, dna en kleine rna-bindende moleculen aangaan
MiRNA, rRNA, tRNA, IncRNA
Het Genoom van pro- en eukaryoten
Kern: histoneiwitten en nucleosoom, chromatine en chromosomen, euchromatine en
heterochromatine
Mitochondiën
Chloroplasten
Chromosomen zitten in de mitose-metafase in de celcyclus
1.2 Isolatie nucleïnezuren
1.3
Isoleren van DNA uit cellen of weefsels
DNA isolatie:
Zuiver DNA nodig voor enzymatische down stream toepassingen
Enzymwerking wordt verstoord wanneer DNA niet zuiver is.
VRAGEN:
Hoe cellen openbreken om DNA uit te isoleren: lysemethode, voorbereidende stappen
Chemisch, biologisch, fysisch, mechanisch, combinatie
Cellyse: Verschil eukaryoten en prokaryoten, verschil in celarchitectuur, verschillende
lysemethoden, verschillende voorbehandelingen nodig.
,n
Chemisch:
1. Detergent (SDS)
2. Alkalische buffer (NaOH)
Biologisch:
3. Proteïnase K
Breekt eiwitten af op de celmembraan en gebonden op nucleïnezuren.
Breed- spectrum proteïnase
Knipt na hydrofobe aminozuren
Eiwitten degraderen
Nucleasen onschadelijk maken
Temperatuur 56° C
Stabiel over een breed pH bereik ( ideaal bij 8)
Buffer:
Activiteit omhoog door detergenten, en chaotrope stoffen
o Want -> denatureren het substraat waardoor dit beter
toegankelijk wordt voor het enzym
Combinatie van verschillende methoden:
4. In humane cellen:
Proteïnase K en detergent en warmte Lysebuffer voor nucleïnezuurisolatie
Chaotrope stof of chaotroop zout
GuSCN, ethanol, SDS, Ureum, guanidiumchloride, MgCl2, fenol
Verhoogt de entropie door interfereren met intermoleculaire
krachten:
o Waterstofbruggen
o Van der Waals krachten
o Hydrofobe effecten
, Verbreken watermantel rond DNA, denatureren eiwitten,
bescherming DNA door inactivatie nucleasen, verhogen
membraanpermeabiliteit hydrofoobeffect
Lysozyme (biologisch)
5. Hydrolyseert peptidoglycaan
6. Breekt celwand van grampositieven open
Hoe zuiveren we het DNA? Hoe verwijderen we de overige celcompomenten?
Cellysaat bevat: DNA in waterige oplossing, RNA in waterige oplossing, afbraakmateriaal van
cel, detergens, proteïnase K, chaotroop agens,…
Verschillende DNA- isolatietechnologieën (zie scheidingstechnieken)
1. Vroeger:
Fenol- chloroform extractie maar schadelijke producten
2. Sinds 1990: Boom- “Extractie”
Kolomchromatografie
Extractie: fenol-chloroform
1. Waterige fase: DNA
2. Interfase: celdebris
3. Organische fase: proteïnen, lipiden
4. VOORDELEN:
Zeer zuiver DNA
Zeer goede opbrengst
5. NADELEN:
Tijdrovend
Isopropanol precipitatie
Schadelijke organische solventen
Residuele organische solventen interfereren met DNA- concentratiebepaling
en enzymatische DNA- manipulatie
Boom- “Extractie”: Silicakolommen
1. Adsorbtie van DNA op silicagel
Samenstelling bindingsbuffer:
Hoge zoutconcentratie en chaotroop agens
Functie bindingsbuffer:
Verwijderen watermantel van DNA
Verwijderen watermantel kolom
Vormen kationbrug tss silicakolom en negatief geladen DNA
2. Verwijderen van contaminanten
Wassen:
Ethanol en hoge zoutconcentratie
, DNA blijft gebonden aan de kolom
Contaminanten worden weggewassen
Verwijderen enzyminhibitoren
3. Elutie van DNA
Lage zoutconcentratie
Geen carry-over van ethanol
4. VOORDELEN:
Snel
Minder schadelijke organische solventen
Zuiver en geconcentreerd DNA
Makkelijk te automatiseren
Hoe bewaren we DNA?
Hoeveel DNA kunnen we zuiveren uit een bepaald monster/staal?
Hoe bewaren we het startmateriaal?
Buffer:
1. Dnase-vrij water
2. Tris-EDTA buffer ( DNA blijft langer stabiel maar mogelijks nadeel door downstream
applicaties)
Temperatuur:
1. Standaard: bij -20°C
2. -80°C voor heel lange periode
Startmateriaal kan bewaard worden (6maand) na toevoegen proteïnase K
Elutievolume hangt af van de hoeveelheid DNA
Kwantitatief:
DNA-concentratie
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur Rielle. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €9,96. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
56880 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 15 ans