Resume

Samenvatting-Flowcytometrie

0 fois vendu

Cours
Celcultuur en immunochemie

Établissement
Universiteit Antwerpen (UA)

Dit is een samenvatting van het deel flowcytometrie, dat een onderdeel is van het opleidingsonderdeel celcultuur en immunochemie, alles wat de prof heeft gezegd tijdens de les staat hier, samen met de informatie die op de powerpoint staat.

[Montrer plus]

Aperçu 3 sur 22 pages

Voir l'exemple

Publié le 12 mars 2025
Nombre de pages 22
Écrit en 2023/2024
Type Resume

analytische toepassingen
anatomie van de fcm
fluidics
optica
elektronics
droplet sorting
flurochromes
analytische apparatuur en meetprincipes
hydrodynamische focussering

€7,16

Egalement disponible en groupe à partir de €10,89

Ajouter au panier

Enregistrer

Garantie de satisfaction à 100%
Disponible immédiatement après paiement
En ligne et en PDF
Tu n'es attaché à rien

Document également disponible en groupe (1)

Samenvatting celcultuur + flowcytometrie

€ 15,12 € 10,89 2 éléments

1. Resume - Samenvatting-celcultuur en immunochemie
2. Resume - Samenvatting-flowcytometrie
Montrer plus

FLOWCYTOMETRIE
DEEL 1: ANALYTISCHE APPARATUUR EN MEETPRINCIPES

INLEIDING

CD-nummer  cluster of differentiation  geeft type eiwit weer dit tot expressie komen op bepaalde
cellen  hiervan kan celtype afgeleiden worden

Vb.

 CD34 = stamcelmerker
 CD19 = heel specifieke B-cel merken

Als ze allebei voorkomen kunnen ze kwaadaardig zijn

TERMINOLOGIE
- Parameter
o Fysisch/chemisch kenmerk van de cel (vb.DNA inhoud)
o Fysische eigenschappen van de cel (lichtstrooiing of fluorescentie)
o Intrinsieke/extrinsieke fysische eigenschappen van een reagens geassocieerd met de
cel
- Excitatie  Proces waarbij optische energie geabsorbeerd wordt
- Extinctie coefficient (ε)
o Efficiëntie waarmee optische energie geabsorbeerd wordt
o Afhankelijk van golflengte
- Emissie  Proces waarbij optische energie terug vrijgesteld wordt
- Quantum opbrengst (Q)
o Efficiëntie waarmee energie wordt vrijgesteld (0-1), meestal als fluorescentie
o Onafhankelijk van golflengte
- Stokes shift  Verschil in energie tussen excitatie en emissie golflengte max
o Zorgt ervoor dat we verschillende moleculen met verschillende fluorescentie
karakteristieken kunnen gebruiken, zorgt dat we aan multicolour FCM kunnen doen
- Spectrum  Verdeling van excitatie en emissie golflengtes

DEFINITIE

De techniek van flow cytometrie werd ontwikkeld in de jaren ‘70 van de vorige eeuw en is gebaseerd op
de detectie van de lichtverstrooiingssignalen die opgewekt worden ingevolge de snelle passage van
afzonderlijke cellen doorheen een lichtbundel die tot microscopisch kleine dimensie is gefocusseerd
(typische afmeting: ellipsoid intensiteitsprofiel van 20 op 50 μm).

Flow  stromen in een vloeibare oplossing

- Wat mogelijk is door de hydrodynamische focusering van de celsuspensiestroom in een
laminaire geleidingsvloeistifstroom

Cyto  cel

- Van afzonderlijke cellen doorheen het centrum van een, tot een microscopisch kleine spot
gefocusseerde lichtstraal

,Metrie  meten

- Dectie van lichtsignalen, opgewekt ten gevolge van de snelle doorgang

FLOWCYTOMETRIE = het meten van fysische en chemische eigenschappen van cellen in een constante
stroom

Hoe gaat het tewerk

De flowcytometer werkt door een laserstraal te richten op individuele cellen die door een meetpunt
stromen. Een "optische vingerafdruk" wordt gegenereerd voor elke cel binnen een heterogene
populatie als deze door de bundel gaat. Wanneer cellen gelabeld zijn met fluorescerende probes,
kunnen verschillende parameters van elke cel tegelijkertijd bepaald worden. Aangezien de cellen snel
worden ondervraagd, kunnen gegevens en duizenden cellen in seconden worden verkregen.

METEN VAN INDIVIDUELE CELLEN

Elk partikel of cel in oplossing met een grootte van 0.2 – 150 μm is geschikt voor flowcytometrische
analyse

Bepaalde cellen zijn uitermate geschikt voor FCM = Leukocyten in bloed

In tegenstelling tot solide tumoren en andere weefsels  zijn er disaggregatie-protocols om als een
singel cel voor te komen dit kan op 2 manieren gebeuren

- Enzymatisch
o Collagenase
- Mechanisch + filteren

Als de stroom veel breder is kan er veel cellen
voorbij komen maar niet alle cellen gaan daardoor
goed kunnen bestraald worden

Er zijn 2 belangrijke voorwaarden

1. Cellen bevinden zich altijd in een singel cel suspensie = cellen moeten zich individueel
bevinden + in oplossing
o Niet meer in geaggregeerde vorm
bv: bloed  bevinden zich al in single cell suspensie / Leukocyten in het bloed zijn uitermate
geschikt omdat ze zich al in single cell suspensie bevinden / weefselbiopt minder geschikt 
eerst disaggregatie nodig om individuele cellen te verkrijgen
2. Celstroom wordt hydrodynamische gefocusseerd

HYDRODYNAMISCHE FOCUSSERING
Vertrekkende van een celsuspensie, de cellen één na één doorheen de lichtbundelfocus te sturen
baseert men zich op het door Crosland-Taylor in ontwikkeld principe van de hydrodynamische

, focussering van de celsuspensiestroom in een -onder laminaire condities stromende-
geleidingsvloeistofstroom

De laminaire condities werden bepaald door het Reynolds getal  Re = drn/h

d = diameter ρ = dichtheid van de vloeistof v= gemiddelde snelheid van de vloeistof η = viscositeit van
de vloeistof

Als het Reynolds getal < 2300 = laminaire stroom als het > 2300 = turbulente stroom (cellen kunnen niet
een per een gealigneerd worden)

Op die manier worden de cellen op één lijn gelijkgericht in de tot microscopische afmetingen versmalde
celsuspensie-stroom die aan een snelheid van ~10 m/sec precies gericht wordt doorheen de
lichtbundelfocus

ANATOMIE VAN DE FCM

Het apparatuur bestaat uit 3 onderdelen:

FLUIDICS
= vloeistof gedeelte  transport van partikels naar de lichtbron cellen worden aangestraald om een
lichtsignaal te veroorzaken. Deze licht signalen worden gegenereerd en gecapteerd door het optische
systeem

Onderdelen

- Flowcel
- Staal
- Sheath tank  bevat geleidingsvloeistof

Voor een optimale aanstraling is het belangrijk dat de stroom die de partiekels transporteert centraal in
de laserstraal gepositioneerd zijn  slechts 1 cel/partikel tegelijk door de laserstraat

Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:

Qualité garantie par les avis des clients

Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.

L’achat facile et rapide

Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.

Focus sur l’essentiel

Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.

Foire aux questions

Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?

Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.

Garantie de remboursement : comment ça marche ?

Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.

Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?

Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur aminaderyckere. Stuvia facilite les paiements au vendeur.

Est-ce que j'aurai un abonnement?

Non, vous n'achetez ce résumé que pour €7,16. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.

Peut-on faire confiance à Stuvia ?

4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)

63950 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours

Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 15 ans

Commencez à vendre!