Samenvatting
Samenvatting methoden in biomedisch onderzoek hoofdstuk 11 elektroforese, western blot
- Instelling
- Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
ik was geslaagd voor alle vakken via mijn samenvattingen ;)
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 6 pagina's
Voorbeeld 2 van de 6 pagina's
In winkelwagenVoorbeeld van de inhoud
Elektroforese en western bot (11)Methoden voor biomedische wetenschappen
Principe elektroforese
= scheiding van geladen deeltjes doorheen een gel onder invloed van elektrisch veld
Gelsystemen:
1. Agarose
└ Polysaccharide = polymeer van agarobiose
└ Niet-toxisch
└ Horizontale gels
└ Scheiding van nucleïnezuren
2. Polyacrylamide
└ Cross-linked polymeer van acrylamide
└ Neuro-toxisch (acrylamide)
└ Verticale gels
└ Scheiding van eiwitten
! Onder denaturerende condities of natief (3D structuur al dan niet bewaard)
Agarose gel elektroforese
1. Gieten agarose gel = poeder met buffer opwarmen + afkoelen in gelbalkje met kam
2. Staalvoorbereiding = laadbuffer toevoegen aan DNA/RNA
└ Kleurstof om staalmigratie te volgen
└ Glycerol om staal zwaarder te maken dan elektroforesebuffer
3. Gel lopen
4. Visualiseren DNA/RNA via bindende kleurstoffen fluorescent signaal
└ Ethidiumbromide geeft zichtbaar signaal onder UV licht
Toxisch en mutageen / carcinogeen
└ SYBRsafe geeft zichtbaar signaal onder blauw licht
Minder mutageen
Toepassingen:
- Nakijken lengte DNA fragment ladder als referentie
- Scheiden van DNA fragmenten voor opzuivering
- Nakijken integriteit / intactheid van RNA
, Polyacrylamide gel elektroforese (PAGE)
SDS-PAGE = gedenatureerde eiwitten scheiden volgens massa / lengte
SDS toevoegen = ionisch detergent dat bindt aan aminozuren, zorgt voor
ontvouwen eiwit en geeft eiwit uniforme negatieve lading
Mercapto-ethanol , DTT of TCEP toevoegen = voor reductie disulfidebruggen
Opwarming tot 70°C
Stacking gel bovenaan de gel
└ Lager % polyacrylamide
└ Concentreren van staal voor het in scheidingsgel terecht komt
Betere resolutie scheiding en scherpere banden in scheidingsgel
Scheidingsgel onderaan de gel
└ Hoger % polyacrylamide
└ Scheiding van eiwitten volgens massa
Aankleuren van eiwitten
met Coomassie of zilverkleuring
Netto
ladin
Isoelectric focussing (IEF) = scheiding van eiwitten volgens isoelektrisch punt g
bij pH waarbij eiwit geen netto lading heeft
1) Aan lage/hoge pH hebben eiwitten een +/- lading
2) Migratie eiwitten door EV ladingen eiwitten veranderen door pH gradiënt
3) Als eiwit regio bereikt waar pH = pl stopt het migreren omdat het geen lading heeft
Toepassing: nakijken post-translationele modificaties
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper julievandenabbeele. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €4,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 77254 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen