100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na je betaling Lees online óf als PDF Geen vaste maandelijkse kosten
logo-home
Samenvatting methoden in biomedisch onderzoek hoofdstuk 13: analyse van DNA €4,99
In winkelwagen

Samenvatting

Samenvatting methoden in biomedisch onderzoek hoofdstuk 13: analyse van DNA

 1 keer verkocht

Ik was geslaagd voor alle vakken via mijn samenvattingen ;)

Voorbeeld 2 van de 9  pagina's

  • 10 augustus 2022
  • 9
  • 2022/2023
  • Samenvatting
Alle documenten voor dit vak (40)
avatar-seller
julievandenabbeele
Analyse van DNA
Methoden hoofdstuk 13


DNA extraheren



1. Lyseren = cellen afbreken zodat DNA vrijkomt

- Detergenten zoals SDS, Trizol, Guanidium chloride …

- Invriezen en ontdooien
└ Cellen leefbaar houden: invriezen via cryopreservatie

- Mechanische homogenisatie
└ Pletten in vloeibare stikstof tot poeder in mortier met pestel
└ Beads toevoegen en schudden aan hoge snelheid

- Vloeibare homogenisatie
└ Douncer = oplossing tussen glazen pestels
 Houdt organellen intact

- Sonicatie (geluidsgolven)


DNA isoleren uit bloedstaal
- Antistollingsmiddel toevoegen = EDTA
- Witte bloedcellen hebben kern en dus DNA
- Rode bloedcellen hebben geen kern  eerst deze lyseren via NH4Cl


DNA isoleren uit weefsel
- Pletten in vloeibare stikstof tot poeder in mortier met pestel


DNA isoleren uit cellen
- Detergent SDS toevoegen voor eiwitdenaturatie en afbraak van membranen
- Enzymes die eiwitten & RNA afbreken toevoegen (proteasen & RNase)
- EDTA toevoegen  inhiberen van DNasen doordat het Mg2+ complexeert

, 2. DNA isoleren = DNA uit lysaat halen of opzuiveren, eiwitten en RNA afbreken

- Via organische solventen  denatureren eiwitten

1) Aan lysaat fenol-chloroform toevoegen
2) DNA nu gescheiden van RNA en eiwitten
3) Waterlaag met DNA overbrengen naar nieuwe tube
4) Alcoholprecipitatie van DNA uit waterlaag


- Via ontzouting  eiwitten en celdebris slaan neer door hoge zoutconcentratie

1) Alcoholprecipitatie van DNA uit supernatans (bovenstaande waterlaag)
2) Zout + alcohol toevoegen waardoor DNA zich oprolt
3) DNA vlok met pasteurpipet opvissen en overbrengen in nieuwe tube


- Via kolomchromatografie  DNA bindt selectief aan matrix in kolommetjes

Silica kolom
1) Buffer met chaotrope zouten  lysis, inhibitie nuclease & binding DNA kolom
2) Spin kolom = vloeistof door kolom sturen door centrifugeren
3) Elutie van DNA = losmaken

Anionenuitwisselingschromatografie
└ Bij lage zoutconcentratie elueren RNA en eiwitten  wegwassen
└ Bij hoge zoutconcentratie elueert DNA


- Alkalische lyse  extractie van plasmiden uit bacteriën

1) SDS toegepast
2) NaOH zorgt voor denaturatie van DNA
3) Denaturatie bacterieel chromosoom en plasmide DNA
4) Neutraliseren: enkel plasmide DNA renatureert
5) Alcoholprecipitatie of anionenuitwisselingschromatografie zuivert plasmide

Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:

Bewezen kwaliteit door reviews

Bewezen kwaliteit door reviews

Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!

In een paar klikken geregeld

In een paar klikken geregeld

Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard en je bent klaar. Geen abonnement nodig.

Focus op de essentie

Focus op de essentie

Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper julievandenabbeele. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €4,99. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 67479 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Start met verkopen
€4,99  1x  verkocht
  • (0)
In winkelwagen
Toegevoegd