100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na betaling Zowel online als in PDF Je zit nergens aan vast
logo-home
Eerder door jou gezocht
Eerder door jou gezocht
logo
Samenvatting Methoden in het biomedisch onderzoek 1 Hoofdstuk 11 Elektroforese en Western blot €3,49   In winkelwagen
Snel navigeren naar
Voorbeeld
  2.  
  3. Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
  4.  
  5. Biomedische Wetenschappen
  6.  
  7. Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1

Samenvatting

Samenvatting Methoden in het biomedisch onderzoek 1 Hoofdstuk 11 Elektroforese en Western blot
 2 keer bekeken  1 keer verkocht

Samenvatting hoofdstuk 11 Elektroforese en western blot

Voorbeeld 2 van de 5  pagina's

Document informatie

  • 16 januari 2023
  • 5
  • 2020/2021
  • Samenvatting

Onderwerpen

Geschreven voor

Alle documenten voor dit vak (39)

Verkoper

avatar-seller
elienbloemen

Ontvangen beoordelingen

Voorbeeld van de inhoud

Methoden in biomedisch onderzoek
Hoofdstuk 11: elektroforese en western blot

Introductie elektroforese

 Principe
o Systeem:
 elektrisch veld doet geladen deeltjes bewegen
 gel werkt als zeef
 scheiding volgens lading en/of massa (= grootte)
o Twee gelsystemen
 Agarose gel =
 Polysaccharide: polymeer van agarobiose, akomstig van zeewier en niet-
toxisch
 Horizontale gels die aan scheiding van nucleïnezuren (DNA/RNA) doen
 Polyacrylamide gel
 Cross-linked polymeer van acrylamide (acrylamide = neuro-toxisch)
 Verticale gels dia aan scheiding van eiwitten doen met een kleinere
poriegrootte dan agarose gel  Scheiding van kleine DNA fragmenten

Scheiding van nucleïnezuren op een agarose gel

 Werkwijze
o Gieten van de gel
 agarose poeder met buffer opwarmen -> agarose smelt (buffer: TAE (Tris-acetaat-
EDTA) of TBE (Tris-boorzuur-EDTA))
 afkoelen in gel tray met kam
o Staalvoorbereiding: mengen staal met laadbuffer
 kleurstof om migratie staal te volgen (bromofenolblauw, xyleencyanol)
 glycerol om staal zwaarder te maken dan elektroforesebuffer
o Gel laten lopen
o Visualiseren eiwitten via eiwitbindende stoffen
 Toegevoegd bij het maken van de gel of gekleurd na lopen gel
 Ethidiumbromide (EtBr)
 zichtbaar signaal onder UV licht (DNA schade)
 zeer gevoelig (detecteert band 1-5 ng DNA)
 toxisch en mutageen/carcinogeen
 SYBRsafe
 zichtbaar onder blauw licht (en UV)
 zeer gevoelig (detecteert band 1-5 ng DNA)
 minder mutageen (maar wel toxisch en met nodige voorzichtigheid
hanteren!!!!)
 Toepassingen
 Nakijken lengte DNA fragment (ladder als referentiepunt)
 Scheiden van DNA fragmenten voor opzuivering
 Nakijken integriteit van RNA (intacte 28S en 18S ribosomaal RNA banden in
eukaryoot RNA)

, Polyacrylamide gel elektroforese (PAGE)

 SDS-page = scheiding van eiwitten volgens massa
o Principe
 Gevouwen (natieve) eiwitten met positieve en negatieve ladingen  denaturatie
 SDS = sodium dodecyl sulfaat, een ionisch detergent dat bind aan aminozuren en
ontvouwt eiwitten en zorgt voor een uniforme negatieve lading
 Ongevouwen lineaire structuur met negatieve lading proportioneel aan lengte (en
dus massa) van het eiwit
o Twee gels
 Stacking gel : bovenaan met lager percentage PA, concentreert het staal voor het in
scheidingsgel terecht komt
 Betere resolutie scheiding en scherpere banden
 Scheidingssgel : onderaan, een hoger percentage PA dat vast of in een gradiënt kan
zijn, scheiding van eiwitten volgens lengte
 Isoelectric focussing (IEF) = scheiding van eiwitten volgens lading
o Lading
 De lading van een eiwit is afhankelijk van de aminozuursamenstelling (Lys, Arg, His
maakt positief terwijl As of Glu negatief maakt)
 De lading van de aminozuren is afhankelijk van de pH wat betekent dat in sommige
pH milieus het eiwit toch geen netto lading heeft  isoelektrisch punt
 Omdat de aminozuursamenstelling dit punt bepaalt kunnen we via die gegevens
scheiden
o Denaturatie
 Zodat alle aminozuren kunnen worden blootgesteld aan de omgevng
 Gel nodig met geïmmobiliseerd pH gradiënt
 2D elektroforese = scheiding in twee dimensies voor complexe mengsels (IEF en SDS-PAGE elk in een
dimensie)
o Voordelen:
 Goede resolutie van eiwitten: 2000 spots per gel die nog te verbeteren zijn via
prefractionatie (cel fractionatie, chromatografie, pH regio’s,…)
 Detectie posttranslationele modificaties
 Detectie van eiwitten die al dan niet aanwezig zijn in verschillende stalen
o Nadelen
 Niet geschikt voor hydrofobe eiwitten (bv. Membraaneiwitten)
 Beperkt door pH regio
 Analyse en kwantificatie zijn moeilijk
 Beperkte hoeveelheid eiwit kan geladen worden
 Native PAGE = scheiding volgens lading, massa en vorm (geen denaturatie)
o Toepassing
 Opzuiveren eiwitten met enzymatische activiteit
 Bepalen van quaternaire structuur eiwit (monomeer, dimeer, trimeer,...)

Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:

√ Verzekerd van kwaliteit door reviews

√ Verzekerd van kwaliteit door reviews

Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!

Snel en makkelijk kopen

Snel en makkelijk kopen

Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.

Focus op de essentie

Focus op de essentie

Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper elienbloemen. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,49. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 72042 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Start met verkopen
€3,49  1x  verkocht
  • (0)
  Kopen