Labo verslag voor het vak biotechnologie of biochemie.
Bevat 25 pagina's
Inleiding, procedure, oplossingen, Resultaten en besprekingen, besluit, antwoord op een vraagstuk en referentielijst
Goed geschreven en overzichtelijk opgebouwd met duidelijke illustraties en schema's
2. Procedure.................................................................................................. 4
2.1 Bereiding van het ruwe extract.................................................................................4
2.2 Zuivering van het ruwe extract door gelfiltratie.......................................................4
2.3 Bepaling van de efficiëntie van de zuiveringsstap....................................................4
2.3.1 Bepaling van de enzymatische activiteit............................................................4
2.3.2 Bepaling van het proteïnegehalte volgens Lowry...............................................8
2.4 Bepaling van de zuiveringsfactor en het % recovery..............................................10
2.4.1 Bepaling van zuiveringsfactor..........................................................................10
2.4.2 Bepaling van % recovery..................................................................................11
3. Oplossingen............................................................................................. 12
3.1 GHS......................................................................................................................... 12
3.2 Oplossingen bereiden.............................................................................................14
4.1 Zuivering van het ruwe extract door gelfiltratie (Äkta Start)..................................18
4.2 Bepaling van de efficëntie van de zuiveringsstap...................................................18
4.2.1 Bepaling van de enzymatische activiteit..........................................................18
4.2.2 Bepaling van het proteïnegehalte volgens Lowry.............................................23
4.3 Bepaling van de zuiveringsfactor en % recovery....................................................24
4.3.1 Zuiveringsfactor............................................................................................... 24
4.3.2 % Recovery...................................................................................................... 26
Eiwitzuivering: isolatie en
partiële zuivering van invertase
Dit verslag gaat over proef 6: Eiwitzuivering. De proef bestaat uit 4
verschillende delen. Alle aspecten worden hieronder één voor één
behandeld.
1. Inleiding
Invertase is een enzym dat de omzetting van sacharose (sucrose) tot
glucose én fructose (invertsuiker) katalyseert.
Figuur 1: Reactie invertase
Invertase kan men o.a. vinden in een mengsel dat men verkrijgt na het
autolyseren van gistcellen. Om dit invertase te isoleren uit het ruwe
invertase-extract (supernatans), worden er gepaste scheidingstechnieken
en zuiveringsstappen toegepast. Tijdens deze scheiding moet er rekening
gehouden worden met een zo hoog mogelijke zuiveringsgraad en een zo
min mogelijk verlies van het enzym (% recovery).
Om de parameters % recovery en zuiveringsgraad te bepalen, moeten er
zowel voor als na de zuiveringsstappen de nodige testen uitgevoerd
worden om de enzymatische activiteit en het proteïnegehalte van het
enzym te achterhalen.
1.1 Doel
Het doel van deze proef bestaat uit vier stappen.
In het eerste deel van de proef wordt invertase geïsoleerd uit gisten door
de autolyse van cellen. Zo verkrijgt men het ruwe invertase-extract. Dit is
het staal dat men zal onderzoeken.
In het tweede deel van de proef wordt het ruwe invertase-extract
gezuiverd. Hierbij hanteert men een scheidingsmethode, namelijk
gelfiltratie. Gelfiltratie is een techniek waarbij grote deeltjes worden
gescheiden van kleine deeltjes. De grote deeltjes zullen eerder elueren
dan de kleinere. Om de gelfiltratie te verwezenlijken, wordt er gebruik
gemaakt van het toestel Äkta Start (Cytiva).
In het derde deel van de proef wordt de efficiëntie van de zuiveringsstap
(=gelfiltratie) bepaald. Dit wordt gedaan door enerzijds de enzymatische
activiteit te bepalen en anderzijds het proteïnegehalte te bepalen volgens
Lowry. Om de enzymatische activiteit te bepalen, gebruikt men een kit,
namelijk de Invertase Assay Kit (MAK-118; Sigma Aldrich). Indien deze
2
, 3CB 04/10/2021
twee bepalingen zijn gedaan, kan er iets gezegd worden over de efficiëntie
van de zuiveringsstap.
3
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper antonmartens. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €11,39. Je zit daarna nergens aan vast.
