Samenvatting
samenvatting gel elektroforese
- Vak
- Biotechnologie
- Instelling
- Erasmushogeschool Brussel (EhB)
samenvatting gel elektroforese
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 7 pagina's
Voorbeeld 2 van de 7 pagina's
In winkelwagenVerkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
1. Gel elektroforese Scheiding van moleculen (DNA, RNA, EW) op basis van grootte
Scheiding gedreven door de negatieve lading van moleculen
Fosfaatgroep (-)
Suiker
Base
O.i.v elektrisch veld bewegen moleculen richting pos pool door een gel
= kathode (+) naar anode (-) (KNAP)
1.1. Eiwitten
Eiwitscheiding m.B.v verticale elektroforese
Gel = polyacrylamide
Coomassie blauw bindt niet – specifiek aan = EW
1.2. DNA
DNA gescheiden m.B.v horizontale elektroforese
Gel = agarose
Nancy of redsafe (vroeger ethidium bromide) of Diamond bindt specifiek aan DNA
voor visualisatie
DNA in slots
Elektrisch veld
Migratie neg geladen DNA naar pos pool
Visualisatie m.B.v fluorescente dye die bindt aan dsDNA en fluorisceert onder UV licht
Stappenplan: methode en principe
Aanmaak buffer
Aanmaak agarose gel
Laden gel
Elektroforese
DNA visualisatie
1.2.1. Aanmaak buffer
TBE of TAE (2 – voddige beschermende functie voor DNA molecule)
Trips = base Bufferwerking, licht alkalisch -> beschermt DNA
Boorzuur of acetaat = zuur Tegen hydrolyse.
EDTA blokkeert werking van DNase
1.2.2. Aanmaak agarose gel
1
, Agarose = extract van zeewier (vergelijkbaar met gelatine)
Moleculaire zeef
Kleinere molecule bewegen sneller dan grotere moleculen
Grootte DNA molecule uitgedrukt in bp
Agarose poeder vermengen met buffer en opwarmen tot kookpunt
Percentage gel kan aangetast worden
- Vb: 1% agarose gel = 1 g agar/100 ml buffer
Keuze percentage gel hangt af van grootte te scheiden fragmenten
- Kleine frag = hoger percentage gel
- Grote frag = lage percentage gel
Na opwarmen tot kookpunt van mengsel agarose en buffer
Toevoegen fluorescente kleurstof
- Nancy
- Redsafe
- Diamond
- Vroeger ethidium -> zeer toxisch
Na opwarming tot kookpunt van mengsel agarose en buffer
Toevoegen fluoricente kleurstof
Laten afkoelen tot handwarm
Uitgieten in mal = gietvorm/matrijs
Toevoegen slotkam -> slotje vormen
Laten stollen/uitharden
Kammetje verwijderen
1.2.3. Laden van de gel
Pipetteren van DNA oplossing in slotje van de gel
Gel in elektroforese toestel + TBE buffer (onderdompelen)
DNA mengen met loading dye (= laadbuffer)
- Kleurstof: opvolgen pipetteren en elektroforese
- Glycerol: densiteit verhogen zodat DNA oplossing in slotje zakt
- EDTA: beschermen DNA tegen nucleases
Hoe frag grootte bepalen na scheiding van frag?
Pipetteer in 1e laantje DNA ladder = moleculaire merker
Mengsel DNA fragmenten van gekende lengte worden meegelopen tijden
selektroforese
- = referentie waarmee te onderzoeken frag vergeleken kunnen worden
1.2.4. Elektroforese
2
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper lorevanvreckem. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €8,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 72042 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen