Samenvatting
Samenvatting moleculaire biologie labotest
- Instelling
- Hogeschool Gent (HoGent)
Samenvatting van slides en verslagen moleculaire biologie
[Meer zien]Voorbeeld 4 van de 30 pagina's
Voorbeeld 4 van de 30 pagina's
In winkelwagen
Voorbeeld van de inhoud
Moleculaire biologie – labotestBioveiligheid en afspraken L2-labo
Gebruik handschoenen
Handschoenen AAN:
- Jezelf beschermen tegen: bloed, pathogenen, chemicaliën
- Je materiaal beschermen: steriel werken, Rnase-vrij werken, DNA contaminatie voorkomen
Handschoenen UIT:
- Je omgeving beschermen
o Na contact met bloed, pathogenen, chemicaliën
o Buiten het labo (1 handschoen bij transport)
o Voor contact met labo toestellen
o Voor contact met meubilair (kast, kraan, klink, …)
o Voor contact met persoonlijk materiaal (balpen, papier, GSM, …)
o Voor contact met huis (gezicht, handen, …)
o Bij beschadiging
In en uit L2-labo
Niet naar BINNEN:
- Voeding en drank
- Jassen en tassen
- Schrijfgerief
- Rekentoestel
- GSM
- Laptop
- Labomateriaal uit chemielabo’s
1
,Niet naar BUITEN:
- Balpennen en stiften
- Laptop lectoren
- Labojassen met bioveiligheidslabel
- Labomateriaal
Stappenplan epje openen
1. Controleer het label
2. Ontdooi volledig
3. Mengen/vortexen
4. Centrifugeren
5. Open het epje
Specifieke veiligheidsvoorschriften voor practicum moleculaire biologie
- Leg geen schriften en/of boeken op je laboratoriumtafel tijdens het uitvoeren van een
experiment
- Wees zuinig met reagentia
- Werken met eukaryote cellijnen, humane cellenen bloed: correct gebruik van de veiligheidskast
ter bescherming van het experiment en de onderzoeker
- Contaminatievoorkomen bij het uitvoeren van PCR
- Werken met Sybr Green (alternatief voor het meer toxische ethidiumbromide)
Werken met micropipet
- hang de pipetten zorgvuldig in het bijhorende rekje
- breng zorgvuldig een gepaste en zuivere tip aan op de pipettor
- respecteer de uiterste limieten van je pipet-stel het volume in van hoge naar lage stand
- duw de pipet in tot je de eerste weerstand voelt
- plaats de pipetpunt vertikaal en op de juiste diepte in de oplossing
- 1-2 mm voor P10, P20, P100 en P200
- 2-4 mm voor P1000
- 3-6 mm voor P5000
- zuig de oplossing zachtjes op (er mogen geen luchtbellen in zitten) en duw de vloeistof uit onder
een hoek van 20° tot 45° in het gewenste recipiënt
!! Syllabus lezen (in bijlage)
2
, Practicum 1: Humaan gDNA-isolatie en bepalen concentratie en zuiverheid DNA
Leerdoelen:
- HumaangDNA kunnen isoleren uit bloed of celpellet door middel van de silica-
membraantechnologie (kolomchromatografie)
- De kwantiteit en de kwaliteit van het geïsoleerde DNA door middel van spectrofotometrie
(Nanodrop) kunnen bepalen
- Bioveiligwerkenin eenL2-lab
- Correct met de micropipetlerenwerken
- Correct eenmicrocentrifuge kunnengebruiken
bepaling
PCR-amplificatie agarose
DNA-isolatie concentratie en
STR merker gelelektroforese
zuiverheid
Doel gDNA-isolatie
Zuiver DNA afzonderen uit bloed, speekselof uit een celpellet van cultuurcellen met de bedoeling in een
volgend practicum een PCR-analyse uit te voeren op het DNA.
Principe gDNA-isolatie
- Lyse van de cellen
- Verwijderen van contaminanten (proteïnen,...)
- Afzonderen van het DNA
gDNA-isolatie
Lyse van de cellen
- Cellen, weefsel in lysebuffer (≠ PBS: phosphatebuffersaline à zoutbuffer)
Verwijderen van
Celwand, contaminanten
celmembraan
- kapot maken
Verwijderen contaminanten
en van het Elueren van het
A aan de DNA van de
Adsorption = binden van het DNA
drager drager
aan de drager
Elution = elueren van het DNA
van de drager
3
, bepaling
PCR-amplificatie agarose
DNA-isolatie concentratie en
STR merker gelelektroforese
zuiverheid
gDNA-isolatie
Bepalen van de concentratie en zuiverheid van DNA/RNA
Bepalen van de concentratie en zuiverheid van
Spectrofotometer
gDNA-isolatie het DNA/RNA
λ = 260 nm à Bij deze golflengte absorberen de dubbele bindingen van purine en pyrimidine
A =• 1 ➔
Spectrofotometer
c = 50 µg/ml DNA
Bepalen van de concentratie en zuiverheid van
➔ c = 40 µg/ml RNA
het DNA/RNA λ = 260 nm
Bij deze golflengte absorberen de
• Spectrofotometer dubbele bindingen van purine en
pyrimidine
A = 1 ➔ c = 50 µg/ml DNA
→ c = 40 µg/ml RNA
λ = 260 nm
Kwaliteitscontrole DNA
Bij deze golflengte absorberen de
Toestellen VESA: dubbele bindingen van purine en
NA - Nanodrop 2000: concentratie, zuiverheid pyrimidine
ole DNA A = 1 ➔ c = 50 µg/ml DNA
→ c = 40 µg/ml RNA
SA
0
zer - Agilent 2100 bio-analyzer: concentratie
o-analyzer
4
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper joellel3s. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 52510 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen