100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na betaling Zowel online als in PDF Je zit nergens aan vast
logo-home
Eerder door jou gezocht
Eerder door jou gezocht
logo
Samenvatting - Practicum: biotechnologie en biochemie, Primer Design + Restrictie-enzymen (J000496A) €8,49   In winkelwagen
Snel navigeren naar
Voorbeeld
  2.  
  3. Universiteit Gent (UGent)
  4.  
  5. Farmaceutische Wetenschappen
  6.  
  7. Practicum: biochemie en biotechnologie (J000496A)

Samenvatting

Samenvatting - Practicum: biotechnologie en biochemie, Primer Design + Restrictie-enzymen (J000496A)
 0 keer bekeken  0 aankoop

Volledige samenvatting van Practicum Primer Design en Restrictie-enzymen Leerpaden + powerpoints

Voorbeeld 2 van de 9  pagina's

Document informatie

  • 28 december 2023
  • 9
  • 2023/2024
  • Samenvatting

Onderwerpen

Geschreven voor

Alle documenten voor dit vak (14)

Verkoper

avatar-seller
marthevanlerberghe

Voorbeeld van de inhoud

Practicum Primer design + RE


PCR

1/ Wat is PCR?

= Polymerase Chain Reaction

 Uitgevonden door Kary Mullis in 1983
 Doel: enorme hoeveelheden kopieën genereren van welbepaalde DNA-sequentie
 Waarom: genen = zeldzame doelwitten in complex genoom
 PCR: genoeg van gen/dna om analyse te starten

2/ Principe van PCR

 Uitgangsmateriaal PCR: DNA dat sequentie bevat die geamplificeerd dient te worden
 Reactiemengsel
o DNA-polymerase
 Enzym verantwoordelijk voor het uitvoeren vd reactie
 Gebruikt tijdens DNA-replicatie
o 2 primers: forward & reverse
o dNTPs (A, C, G, T)
 Desoxynucleotidetrifosfaten
 Bouwstenen DNA
o MgCl2
 Co-factor voor DNA-polymerase  enzym werkt optimaal
o Buffer
 Mengsel op bepaalde pH houden  reactie optimaal laten doorgaan
 3 stappen in PCR
o Denaturatie
o Annealing
o Elongatie
 1 cyclus, n keer herhalen (afh. van aantal
keer nodig)
 Denaturatie
o Reactiemengsel wordt opgewarmd tot 95°C-
96°C
o Dubbelstrengig DNA valt uiteen in 2
enkelstrengige DNA-moleculen
= Template DNA voor primers die aanhechten
 Annealing
o Mengsel wordt afgekoeld tot ongeveer 60°C (afh van primers)
o Primers aangehecht aan template-DNA
o Kort stuk dubbelstrengig DNA aanwezig, nodig voor DNA-polymerase om aan te
binden
o DNA-polymerase zal adhv. Template-DNA de complementaire basen aanbrengen
 Elongatie
o Bij 72°C : optimale T voor DNA-polymerasen om functie uit te voeren

, o Nieuwe gesynthetiseerde strengen strekken zich uit tot voorbij primer op
tegenovergestelde streng
o Er worden nieuwe primer-bindingsplaatsen gecreëerd op elk nieuw gesynthetiseerde
DNA-streng
 Na n cycli bevat de reactie een theoretisch maximum
o 2n dubbelstrengige DNA-moleculen = kopieën van DNA-sequenties tss. beide primers



3/ Primers

 Kort stuk enkelstrengig DNA, nodig om PCR reactie te starten
 Synthetisch aangemaakt
 2 primers nodig: forward & reverse
o Forward
 Bindt op backward DNA streng
 Van 3’ 5’
o Reverse
 Bindt op forward DNA streng
 Van 5’  3’
 Tm = smelttemperatuur
o Helft primer gebonden op DNA-template en de helft in het mengsel voorkomt als
enkelstrengige DNA-molecule
o Bepaalt annealing temperatuur (ideaal: 3/5°C lager dan laagste Tm vd. primers)
 Eigenschappen goede primer
o 20-30 basenparen lang
o Unieke sequentie
 Primer enkel thv. targetsequentie binnenkomen
o Ze mogen geen inverted repeats bevatten (hairpins)
 Stukje in primer waarvan de complementaire sequentie al een beetje
verder in de primer ook al voorkomt
 2 stukken binden aan elkaar want complementair  vormt hairpin/loop
 Primer kan niet meer binden op DNA-template
o Geen complementariteit tss. forward en reverse primer
 Gaan primer dimers vormen
 Binden op elkaar, niet meer beschikbaar om te binden op DNa-template
o 3’ uiteinde primer
 Rijk aan G en C
 Vormen sterkste binding met elkaar, 3 H-bruggen tov. 2 H-bruggen bij A en T
 Geen misprime: niet complementair met DNA-template (aan 3’ want elke
nieuwe DNA-streng wordt gesynthetiseerd van 5’ nr. 3’)
 Primer moet goed binden thv. 3’ uiteinde: van daaruit start elongatie
o Tm mag max. 3°C verschillen tss. forward en reverse primer
 Hechten bij dezelfde annealingtemperatuur aan het DNA-template

Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:

√ Verzekerd van kwaliteit door reviews

√ Verzekerd van kwaliteit door reviews

Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!

Snel en makkelijk kopen

Snel en makkelijk kopen

Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.

Focus op de essentie

Focus op de essentie

Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper marthevanlerberghe. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €8,49. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 72841 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Start met verkopen
€8,49
  • (0)
  Kopen