Overig
Practical report immunology
- Instelling
- Wageningen University (WUR)
Uitwerking van de vragen
[Meer zien]Voorbeeld 1 van de 2 pagina's
Voorbeeld 1 van de 2 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Voorbeeld van de inhoud
NBT assay in short:1) Macrophages (RAW cells) added in a 96-wells plate (105 cells per well) are cultured overnight to
adhere to the bottom of the well.
2) The culture medium is replaced by NBT solution (formazan salt). NBT diffuses into the cell.
3) Stimuli (e.g. pathogens) are added, and RAW cells are activated to produce oxygen radicals.
4) NBT is turned into the blue coloured formazan (solid) by oxygen radicals.
5) The cell membrane is permeabilized and solubilized by methanol and KOH.
6) The released solid formazan is dissolved by DMSO.
7) The color reaction can be measured in a spectrophotometer
Measuring the capacity of
macrophages to produce oxygen
radicals by applying an NBT
assay
Macrophages are mononuclear leukocytes of the innate immune system present in tissues. Before
the cell leaves the blood and becomes a macrophage, it is called a monocyte.
First, macrophages will recruit other cells to the site of infection. Then, the microbe may bind to the
pattern recognition receptor (PRR) of the macrophage, enabling phagocytosis. After degrading the
pathogen into peptides via free radicals, these smaller peptides are presented on the cell surface via
MHC class II molecules to Th cells (CD4+), which are cells of the adaptive immune system. These
antigen presenting cells (APC) are mostly present in lymphoid organs.
After recognizing a pathogen via TLR, the macrophage increases its O2
uptake. O2 is converted intracellular into O2- (superoxide anion) by using
NADP or NADH. The super oxide dismutase enzyme converts O2- into
H2O2. Together O2- and H2O2 exert strong microbial activity. The capacity
of macrophages to produce O2- will be measured by using NBT (Nitroblue
tetrazolium). O2- converts NBT into blue formazan; a spectrophotometer
can measure this response.
The aim is to determine the conversion of O2 into O2- by measuring blue formazan with a
spectrophotometer.
1. Cells were plated in a 96-wells plate and cultured overnight. Colum 1 only has medium
(blanc), column 2 till 5 are filled with macrophage cell suspension (100 µl)
2. The culture medium of the macrophages was washed away, 100 µl fresh RPMI medium
should be added quickly to avoid a stress reaction of the cells. Washing ensures comparable
conditions for each well.
3. The medium was again removed and all wells were filled with 160 µl NBT
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper michouweimar. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €2,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 67096 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen