Samenvatting
Samenvatting Geïntegreerd practicum 1 (biochemie): practicumverslag
- Vak
- Instelling
Verslag van alle uitgevoerde experimenten tijdens de practica voor het vak geïntegreerd practicum: biochemie uit de 2e bachelor.
[Meer zien]Voorbeeld 4 van de 47 pagina's
Voorbeeld 4 van de 47 pagina's
In winkelwagen
In winkelwagen
gesponsord bericht van onze partner
Verkoper
Volgen
biomed2017
Ontvangen beoordelingen
Voorbeeld van de inhoud
GEÏNTEGREERD PRACTICUMBIOCHEMIE: VERSLAGEN
EXPERIMENTEN 1-5
Academiejaar 2019-2020
Bronnen:
Resultaten afkomstig van eigen bevindingen tijdens het practicum. Theoretische uitleg gebaseerd
op de uitleg en PowerPoint gegeven tijdens de inleidingsles door Prof. Eva Geuens.
0
,Inhoudsopgave
Experiment 1: bepaling succinaat dehydrogenase (SDH) ............................................................................. 5
1. Inleiding en doel .................................................................................................................................... 5
2. Materiaal en methode........................................................................................................................... 5
2.1 Oplossingen ..................................................................................................................................... 5
2.2 Verdunningsreeks TTC ..................................................................................................................... 6
3. Resultaten.............................................................................................................................................. 6
3.1 TTC-ijklijn ......................................................................................................................................... 6
3.2 SDH-assay: bepaling van SDH-activiteit in de subcellulaire fracties................................................ 7
3.2.1 Gemeten OD-waarden ............................................................................................................. 7
3.2.2 Gereduceerde TTC .................................................................................................................... 7
3.2.3 Drooggewicht ........................................................................................................................... 8
3.2.4 Berekening van de uiteindelijke SDH-activiteit ........................................................................ 9
4. Conclusie ............................................................................................................................................... 9
4.1 Histogram ........................................................................................................................................ 9
Experiment 2: afzonderen van het LDH-5 iso-enzym uit leverweefsel ....................................................... 10
1. Inleiding en doel .................................................................................................................................. 10
2. Materiaal en methode......................................................................................................................... 11
2.1 Oplossingen ................................................................................................................................... 11
2.2 Verdunningsreeks BSA................................................................................................................... 14
3. Resultaten............................................................................................................................................ 15
3.1 Ammoniumsulfaat precipitatie van de cytosolfractie ................................................................... 15
3.2 Dialyse ........................................................................................................................................... 15
3.3 Testen van de eiwit en enzym concentratie van de verschillende fracties ................................... 16
3.3.1 LDH-enzym assay van de weefselfracties ............................................................................... 16
3.3.1.1 Fracties: gemeten absorptie............................................................................................ 16
3.3.1.2 Fracties: absorptie per minuut ........................................................................................ 16
3.3.1.3 Fracties: LDH-concentratie (units per liter) ..................................................................... 17
3.3.2 Eiwittest van de weefselfacties: methode van Bradford ....................................................... 17
3.3.2.1 BSA-ijklijn voor LDH ......................................................................................................... 17
3.3.2.2 Fracties: gemeten OD-waarden ...................................................................................... 18
3.3.2.3 Fracties: eiwitconcentratie .............................................................................................. 18
3.3.3 AM-pool .................................................................................................................................. 19
1
, 3.4 Ionenuitwisselingschromatografie ................................................................................................ 19
3.5 Testen van de eiwit en enzym concentratie van de opgevangen stalen ...................................... 19
3.5.1 LDH-enzym assay van de opgevangen stalen ......................................................................... 20
3.5.1.1 Opgevangen stalen: gemeten absorptie ......................................................................... 20
3.5.1.2 Opgevangen stalen: absorptie per minuut...................................................................... 20
3.5.1.3 Opgevangen stalen: LDH-concentratie (units per liter) .................................................. 21
3.5.2 Eiwittest van de opgevangen stalen: methode van Bradford ................................................ 21
3.5.2.1 Opgevangen stalen: gemeten OD-waarden .................................................................... 21
3.5.2.2 Opgevangen stalen: eiwitconcentratie ........................................................................... 22
3.6 SDS-PAGE ....................................................................................................................................... 22
3.6.1 SDS-PAGE gel 1 ....................................................................................................................... 22
3.6.1.1 Staalvoorbereiding gel 1 .................................................................................................. 22
3.6.1.2 Resultaat SDS-PAGE gel 1 ................................................................................................ 23
3.6.2 SDS-PAGE gel 2 ....................................................................................................................... 23
3.6.2.1 Staalvoorbereiding gel 2 .................................................................................................. 23
3.6.2.2 Resultaat SDS-PAGE gel 2 ................................................................................................ 24
3.6.2.3 Opstellen van de merker-ijklijn ....................................................................................... 25
3.6.2.4 Bepaling moleculair gewicht van de LDH-eiwitten ......................................................... 25
3.7 LDH iso-enzym scheiding ............................................................................................................... 26
3.8 Western blotting............................................................................................................................ 27
4. Conclusie ............................................................................................................................................. 28
4.1 Testen van de eiwit en enzym concentratie van de verschillende fracties ................................... 28
4.2 Testen van de eiwit en enzym concentratie van de opgevangen stalen ...................................... 28
4.3 SDS-PAGE ....................................................................................................................................... 28
4.3.1 Gel 1........................................................................................................................................ 28
4.3.2 Gel 2........................................................................................................................................ 28
4.4 LDH iso-enzym scheiding ............................................................................................................... 29
4.5 Western Blotting ........................................................................................................................... 29
Experiment 3: electroforetische scheidingen van serum op SDS-PAGE...................................................... 30
1. Inleiding en doel .................................................................................................................................. 30
2. Materiaal en methode......................................................................................................................... 30
2.1 Oplossingen (idem oplossingen SDS-PAGE experiment 2) ............................................................ 30
3. Resultaten............................................................................................................................................ 32
2
, 3.1 Staalvoorbereiding ........................................................................................................................ 32
3.2 SDS-PAGE ....................................................................................................................................... 32
3.2 Bepaling van de onbekende eiwitten ............................................................................................ 33
4. Conclusie ............................................................................................................................................. 33
Experiment 4: fluorimetrische bepaling van kininesulfaat ......................................................................... 34
1. Inleiding en doel .................................................................................................................................. 34
2. Materiaal en methode......................................................................................................................... 34
2.1 Registreren van een uitdovingscurve van kinine sulfaat: verdunningsreeks kaliumjodide .......... 34
2.2 Opstellen van een kininesulfaat calibratiecurve in af- en aanwezigheid van jodide .................... 35
2.2.1 Verdunningsreeks kininesulfaat ............................................................................................. 35
2.2.2 Twee nieuwe reeksen aanmaken ........................................................................................... 35
2.3 Multiple standaard-additiemethode: concentratiebepaling toegevoegd kininesulfaat ............... 35
3. Resultaten............................................................................................................................................ 36
3.1 Registreren van een dovingscurve van kininesulfaat .................................................................... 36
3.2 Opstellen van een kininesulfaat calibratiecurve in af- en aanwezigheid van jodide .................... 36
3.3 Multiple standaard-additiemethode ............................................................................................. 37
3.3.1 Onbekende staal: berekening van de initiële kininesulfaatconcentratie ............................... 38
4. Conclusie ............................................................................................................................................. 38
4.1 Dovingscurve ................................................................................................................................. 38
4.2 Kalibratiecurve............................................................................................................................... 38
4.3 Multiple standaardadditiemethode .............................................................................................. 38
Experiment 5: bepalen van de Km en Vm van lactaat dehydrogenase via een kinetische methode ......... 39
1. Inleiding en doel .................................................................................................................................. 39
2. Materiaal en methode......................................................................................................................... 39
2.1 Oplossingen ................................................................................................................................... 39
2.2 Verdunningsreeksen ...................................................................................................................... 40
2.2.1 Verdunningsreeks van het substraat...................................................................................... 40
2.2.2 Verdunningsreeks van het enzym .......................................................................................... 40
3. Resultaten............................................................................................................................................ 41
3.1 Bepalen van het pH-optimum van lactaat dehydrogenase ........................................................... 41
3.1.1 Absorptieveranderingen over de tijd bij verschillende pH-buffers ........................................ 41
3.1.2 Bepaling pH-optimum ............................................................................................................ 41
3.2 Enzymactiviteit in functie van substraatconcentratie ................................................................... 42
3
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper biomed2017. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €0,00. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 64438 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen