H1
Cel (nt)
- Vorm volgt functie
- Macroscopie
• Bestuderen met blote oog
• Anatomie
- Microscopie
• Bestuderen met microscoop
• Histologie
- Wegname van weefsels en cellen
• Operatief
o Van organen/weefsels
o 3 soorten
§ Levend
¨ = cytologie
¨ Steriel werken (!)
§ Dood
¨ Invriezen
¨ Fixeren
• Biopsie
• Afzonderlijke cellen
o Aspiratie van weefsel
o Punctievloeistof hol orgaan
o Lichaamsvochten
§ Sputum
¨ Slijm + speeksel
¨ In luchtwegen
§ Urine
§ Bloed
o Schraapsel
Anatomopathologisch onderzoek (nt)
- Belang bij wetenschappelijk onderzoek en kliniek
- Doel
• Diagnose stellen
- Kennis van
• Histologie
o Studie microscopische structuur
§ Van biologisch materiaal
§ In weefselverband
• Cytologie
o Studie van losse cellen
o Niet in weefselverband
1
,Microscopie
- Resolutie
• Kleinste afstand tussen 2 elementen
o Waarbij ze afzonderlijk zichtbaar zijn
• EM: 0,1nm
• LM: 0,2 µm
• Formule
0,61𝜆
𝑅=
𝑁𝐴
o NA
§ Numerieke apertuur
§ Hoeveel licht lens opvangt
• Lichtmicroscopie: 10-7
• Elektronenmicroscopie: 10-10
Lichtmicroscopie
- Soorten
• Wit licht
o Fotonen
o Transmissiemicroscopie
o Weerkaatsingmicroscopie
o Eigenschappen
§ Vergrotingen
¨ Oculair (20x)
¨ Lens (10x)
§ Preparaat/staal
¨ Klein/dun genoeg
¨ Weefsel kleuren
• Fluorescent licht
o Fluoroforen
o Belichten met golflengte
§ λ moet optimaal zijn
§ Fluorfoor vangt licht op (λ1) " wordt geëxciteerd " straal licht uit (λ2) " λ1<λ2
" E1>E2
o Met
§ Chemische verbinding
§ Fluorescente eiwitten
¨ Green fluor proteïne (GFP)
- Weefselbewaring
• Doel
o Voorkomen van afbraakprocessen
§ Afbraakprocessen bij
¨ Gebrek aan zuurstof
¨ Gebrek aan afvoer van afbraakproducten
¨ Vrijkomen van verteringsenzymen
• Fixeren of invriezen
o Afremmen verteringsprocessen en groei
o Behouden van macromoleculaire structuur
o Fixeren
§ Met fixatievloeistof
¨ = Fixator
¨ 5x volume van weefsel
¨ Bv. formol
§ Crosslinking
¨ Vormen covalente bindingen
¨ Met N-terminale groepen van eiwitten
¨ Vasthechten eiwitten aan cytoskelet
2
, § Verlies van enzymatische werking (vaak)
§ Duur
¨ 2-24uur
¨ Afhankelijk van grootte materiaal en methode
§ Voordelen
¨ Goede bewaring
o Invriezen
§ In N2 (l)
§ = fresh frozen
§ Moet snel gebeuren
¨ Met OCT-oplossing + onderkoeld isopentaan
§ Voor kleine weefsels
§ Afremmen enzymatische processen
¨ Bij 37°C weer functie
§ Voordelen
¨ Kan snel
¨ RNA/DNA betere kwaliteit (dan fix)
§ Nadelen
¨ Snelle afbraak van weefsel
¨ Morfologie minder mooi (dan fix)
o Daarna snijden + kleuren
§ Snijden
¨ Na fixatie te zacht
· Harder maken met paraffine
à Verloop
p Materiaal mengen met alcoholoplossing van verschillende
concentraties " alcohol verwijderen " met tolueen of xyleen
" H2O verwijderen uit materiaal " toevoeging paraffine "
opstijven " aansnijden op vriesmicrotoom
¨ Coupes
· Na aansnijden
· 5-10 µm dik
§ Kleuren
¨ Kleurstoffen
· Vaak hydrofiel
¨ Verloop
· Verwijderen paraffine " toevoeging xyleen " oplossen paraffine "
toevoeging alcohol " uitspoelen xyleen " toevoeging H2O " kleuring
¨ Haematoxyline-eosine kleuring(H&E)
· Standaard basis kleuring
· Haematoxyline
3
, à Blauw
p Eigenlijk kleurloos
p Oxidatieproduct is blauw
à Basisch
à Bindt aan zuren
à M.n. in kern
· Eosine
à Rood
à Zuur
à Bindt aan basen
à M.n. in cytoplasma en collageen
¨ Empirische kleuringen
· Ontdekt door trial and error
· Trichoomkleuring
à Mengsel van verschillende kleurstoffen
p Bv. haematoxyline
à Rood
p Keratine
p Spiervezels
à Blauw of groen
p Collageen
p Bot
à Roze of rood
p Cytoplasma
à Bruin of donkerrood
p Kernen
· Zilverkleuring
à Met zilveroplossingen
à Zichtbaar maken
p Bv. DNA en eiwitten
p Door afzetting zilverpartikels op structuur
à Visualisering van reticulline vezels (in lymfeknopen)
¨ Histochemische kleuringen
· Door chemische reactie
à Tussen weefsel en verbinding in kleuroplossing
· Bv. Periodic Acid Schiff (PAS)
à Aantonen koolhydraten
à Reagens
p Periodaat (IO4) + Schiffs reagens
p Periodaat oxideert glycol tot aldehyden
p Schiffs reagens kleurt aldehydegroepen magentarood
à Amylase
p Verteert glycogeen
r Geen kleuring
p Verteert geen glycoproteïnen
r In mucines
r Wel kleuring
¨ Enzym-histochemische kleuringen
· Enzymactiviteit
à Bepaalt kleuring
à Moet na weefselvoorbereiding bewaard zijn gebleven
· Peroxidase kleuring
à Peroxidase
p In meeste cellen + peroxisomen
à Toevoeging waterstofperoxide
p Oxideren van substraat (bv. DAB)
p Ontstaan bruine neerslag
4
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper THKleuven1. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €7,48. Je zit daarna nergens aan vast.