Samenvatting en uitwerking van het onderdeel Eiwitten en Enzymen van Moleculen. Bevat afbeeldingen uit de powerpoints en bijbehorende figuren bij de methoden. Verder bevat het uitwerkingen van de behandelde onderwerpen.
Eiwit onderzoek
- Sommige methoden zijn voor meerdere onderzoeken geschikt, maar niet allemaal.
Analytische methoden
- Doel: kwalitatief en kwantitatief onderzoek; welk eiwit is aanwezig en hoeveel is
daarvan aanwezig
Gelelektroforese
- Scheiding op lading en vorm/grootte
- v = (E x z) : f
- Snelheid = (sterkte elektrisch veld x lading eiwit) : wrijvingscoëfficiënt
- Dragermateriaal: polyacrylamide; moleculaire zeef. Dichtheid bepaalt welke grootte
eiwitten er doorheen kunnen lopen
- Verschillende typen gelektroforese:
SDS-PAGE
- Sodium dodecylsulfaat poly acryl gelelektroforese
- Het SDS denatureert de eiwitten, maakt het een lineaire vorm. Maakt de eiwitten
uniform negatief.
- Alleen scheiding op grootte
- β-mercatoethanol wordt gebruikt om zwavelbruggen te reduceren.
Iso-electric focussing (IEF)
- Polyacrylamide gel met pH gradiënt.
- Op het iso-elektrisch punt van het eiwit is de netto lading nul: het eiwit wordt net zo
hard naar - getrokken als naar +
-
2D elektroforese
- 1e dimensie IEF, 2e dimensie SDS-PAGE
- Van elk eiwit molmassa en iso-elektrisch punt kunnen bepalen
Preparatieve methoden
- Preparatieve methoden zijn gericht op het zuiveren van actief eiwit uit de cel/weefsel
- Eiwitten kunnen van elkaar gescheiden worden op basis van grootte, oplosbaarheid,
lading, bindingsaffiniteit
, - Doel: Het verkrijgen van een oplossing met een zo hoog mogelijke activiteit, met zo
min mogelijk verschillende eiwitten.
Dialyse: in- en uitzouten
- Principe: semi - permeabele membraan laat alleen kleine moleculen door
-
Gel-filtratie
- Kolom met gelbolletjes waar kleine eiwitten in kunnen binden. Je vangt fracties op.
De grote eiwitten komen als eerst uit de kolom.
-
Ionenwisselaar
- Eiwitten binden aan geladen gelbolletjes. De lading van het eiwit bepaalt de
bindingssterkte.
- Met een zoutgradiënt is de binding te verbreken: elutie
, -
(Ultra)-centrifugatie
- Met zeer hoge G krachten deeltjes scheiden.
- De sedimentatiesnelheid (bezinkingssnelheid) is afhankelijk van massa, vorm,
dichtheid van deeltje en dichtheid van oplossing.
-
- (^ gradiëntcentrifugatie)
Antilichamen
- Antilichamen worden gebruikt voor zuivering en detectie van eiwitten. Ze herkennen
een bepaald epitoop, die op een bepaald antigen zit.
- Een polyclonaal antilichaam zijn meerdere antilichamen die meerdere epitopen
herkennen.
- Een monoclonaal antilichaam is een zuiver antilichaam dat een type epitoop herkent.
- Monoclonale antilichamen hebben minder ‘contaminatie/vervuiling’, maar polyclonaal
herkent zelfde antigen in meerdere isovormen.
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper suzanvankranenburg. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,99. Je zit daarna nergens aan vast.
