Toolbox biotechnologie: Hoofdstuk 3
PCR = polymerase chain reaction / polymerase ketting
reactie
Er is voldoende DNA nodig om een duidelijk bandenpatroon te kunnen herkennen
Belangrijke tool om 1 stukje DNA/RNA in vitro miljoenen keer te vermenigvuldigen in korte tijd (± 2u)
lijkt erg op DNA replicatie in natuur
amplificatie = kleine hoeveelheden DNA vermenigvuldigen
kan zeer specifiek een bepaalde regio van de DNA sequentie detecteren
Toepassingen PCR
Diagnose ziekte en opsoren van genen
Identificatie bacteriën en virussen als er niet genoeg startmateriaal is om het direct op gel te zetten
om aan te tonen wat de ziekteverwekker is
Covid-19 word gediagnosticeerd via een PCR test
Er word een DNA-extratie gedaan van een neus-keelswap met viraal materiaal waar men
vervolgens een PCR reactie op gaat uitvoeren die zeer specifiek is voor Covid-19
Forensisch onderzoek
Vaak zeer weinig DNA materiaal best eerst vermenigvuldigen vooraleer men een deftig
onderzoek kan voeren
Authenticiteit levensmiddelen
GMO’s van bv plantencellen om na te gaan of het organismen (plant) wel degelijk een GMO
plant is of natuurlijke plant
PCR werking en benodigdheden
DNA template = waaruit het te onderzoeken stukje DNA (Target DNA) komt
Primers = enkelstrengig / single-stranded (ssDNA) dat template DNA gaat afbakenen tot target DNA
DNA polymerase = enzym dat ervoor zorgt dat de enkele streng word aangevuld tot een dubbele
streng = verlengen van keten. Kan dit alleen doen als er bouwstenen aanwezig zijn
Bouwstenen = dNTP’s of nucleotiden
Buffer = omdat de DNA polymerase zich in een bepaald medium moet bevinden
Thermocycler = toestel met een thermoblok waarin men snel temperatuurschommelingen kan
teweegbrengen. In deze thermoblok kan men de typische kleine PCR epjes steken (0,5ml)
De 3 stappen van PCR
Denaturatie = dsDNA wordt ssDNA
Annealing = vasthechten van primers (hybridisatie)
Extension / elongatie = verlenging van de keten
Denaturatie bij 95°C
Het splitsen van dsDNA naar ssDNA zodat primers kunnen hechten in volgende stap
waterstofbruggen tussen beide ketens worden verbroken maar covalente bindingen blijven
onaangetast
Annealing / vasthechten primers / hybridisatie bij 50 – 65°C
Vasthechten van primer aan ssDNA
Temperatuur hangt af van welke primer gebruikt word (hoe nucleotidesequentie is opgebouwd)
2 verschillende primers in verschillende richtingen = forward en reverse primer
DNA polymerase heeft startpunt nodig in de vorm van een stukje dsDNA = primers
Primers = kleine stukjes ssDNA, ± 15 tot 40 bp lang, die precies complementair zijn aan de
uiteinden van het stuk DNA waarin we geïnteresseerd zijn
primerdesign = het opleggen van specificaties aan de primers
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper fraukevanmeulder. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,99. Je zit daarna nergens aan vast.