Samenvatting
samenvatting hoofdstuk 2 toolbox biotechnologie
- Vak
- Biotechnologie
- Instelling
- Erasmushogeschool Brussel (EhB)
het 2e hoofdstuk van het gedeelte toolbox samengevat
[Meer zien]Voorbeeld 1 van de 2 pagina's
Voorbeeld 1 van de 2 pagina's
In winkelwagenVerkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
Toolbox biotechnologie: Hoofdstuk 2Gelelektroforese
Horizontale elektroforese
DNA scheiding
Gel = agarose
Nancy, Redsafe (vroeger ethidiumbromide) of Diamond bindt specifiek aan DNA voor visualisatie
Verticale elektroforese
Eiwitscheiding
Gel = polyacrylamide
Coomassie blauw bindt aspecifiek aan EW
Stappenplan: methode en principe
Aanmaak buffer
Aanmaak agarose gel
Laden gel
Elektroforese
DNA visualisatie
Aanmaak buffer
TBE of TAE = heeft 2-voudige beschermende functie
Bestaat uit:
Tris (base)
Zorgt ervoor dat pH behouden blijft en beschermd DNA tegen hydrolyse
Boorzuur of Acetaat (zuur)
EDTA (ethyleendiaminetetra-azijnzuur) → blokkeert werking van DNase
Deze buffer word gebruikt voor de aanmaak van de agarose gel
Aanmaak agarose
Agarose = extract van zeewier
moleculaire zeef = kleinere molecule DNA zullen sneller doorheen gel bewegen dan grotere
1g agar (poeder) per 100 ml TBE (buffer) = 1% gel
Agarosepercentages kunnen variëren van 0.3% agarose tot 4%
Hoe kleiner het agarosepercentage hoe groter de te scheiden DNA grootte
Poeder + buffer mengen en opwarmen tot kookpunt, daarna fluorescente dye toevoegen (Nancy)
Handwarme oplossing uitgieten in mal + slotkam toevoegen die na uitharden verwijdert word
Laden gel
Gel overbrengen in elektroforese toestel en aanvullen met TBE buffer tot gel volledig onder staat
DNA stalen pipetteren in de slotjes = laden van de gel
Laadbuffer/ loading dye word toegevoegd aan het DNA voor 2 redenen:
Bevat kleurstof: om pipetteerproces en elektroforese makkelijker visueel te volgen
bevat glycerol: maakt DNA oplossing zwaarder zodat deze makkelijk uitzakt in de slotjes
(densiteit van DNA oplossing wordt verhoogd)
Elektroforese
40 tot 60 minuten op 70 – 100V
Elektrisch veld ontstaat: - geladen DNA moleculen kunnen migreren richting positieve electrode
DNA is negatief geladen en migreert van de kathode (-) naar de anode (+)
Elektrocutiegevaar
De afstand van migratie gebeurt in functie van de grootte van de moleculen
Steeds visueel volgen
Controle of elektroforese gestart is = vorming van bellen
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper fraukevanmeulder. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 72042 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen