Samenvatting
VOLLEDIGE Samenvatting Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1
Alle hoofdstukken van het volledige jaarvak samengevat, alles staat erin Ik had met deze samenvatting 18/20
[Meer zien]Voorbeeld 3 van de 66 pagina's
Voorbeeld 3 van de 66 pagina's
In winkelwagen
Voorbeeld van de inhoud
Methoden allesHoofddoelen verschillende technieken
Celculturen
Functie: studiemateriaal
Bv.: Primaire-, geïmmoraliseerde-, kanker-, stamcelcultuur
Methode (staalbereiding):
1) fysiologische vloeistof afnemen 2)cellen van interesse selecteren 3)in cultuur brengen
4) invriezen (cryopreservatie) of verder mee werken (in incubator)
Weefselculturen
Functie: studiemateriaal
Methode (staalbereiding): 1) staalname 2)bewaren via fixatie (op kamerT) of invriezen
Modelorganismen
Functie: studiemateriaal
Bv.: Gist, worm, vlieg, zebravis, kikker, muis
Centrifugatie
Functie: scheiden deeltjes
Bv.: isolatie van plasma, PBMC, serum, organellen of celfractioneringen
Methode scheiding:
- Sedimentatie dmv Fz
→op grootte, densiteit, vorm
- Klassieke: afdraaien => pellet
- Differentiële: afdraaien met ≠G-force => isolatie organellen (≠zuiver)
- Densiteitsgradient: Zonale: staal op gemaakte gradient en afdraaien
→ op grootte en massa
Isopycnische: mengen gradient en staal + afdraaien
→ op densiteit
Methode afdraaien: via rotor (vaste hoek, swinging bucket, verticale)
→ lage vs hoge vs ultrasnelheid (analytische en preparatieve)
FACS en MACS
Functie: celsortering van levende cellen
Bv.: single-cell (FACS)
Methode: FACS: fluoresc. antistof tegen cellen van interesse: laser => lading => scheiding (electrode)
MACS: magnetische antistof: magnetisch veld in kolom => gemerkte uit suspensie
LCM
Functie: celsortering bij weefsels => levende cellen selecteren
Methode: IR-laser => film klevering => plakt aan weefsel
UV-laser => deel weefsel in tube catapulteren
,Immunodetectie
Functie: visualiseren/ selecteren cel van interesse
Methode:
! vals positieve (selectiviteit) vs vals negatieven (sensitiviteit)
Lichtmicroscopie
Functie: lichtbron door structuur sturen
=> vergroten met voldoende resolutie en contrast (contrast door het licht)
Methode:
- Kohlerbelichting: condensor lens positioneren zodat velddiafragma (beeldvlak) scherp
=> parallelle lichtbundel door preparaat => homogene belichting
- Contrasttechnieken:
▪ Klaarvleld: kleuring => contrast
▪ Donkerveld: strooilicht opvangen => contrast
▪ Fasecontrast: interferentie verstrooide en directe licht => contrast
▪ DIC en polarisatiecontrast: interferentie 2 ⊥ gepolaris. lichtbundels => contrast
Bioluminescentie
Functie: lichtemissie => meten mechanismes gekoppeld met genexpressie (en post-TXN-regulatie)
=> meten celviabiliteit (cytotoxiciteit), kinaseactiviteit, contaminatie
=> in vivo: snelle detectie tumor (meet via CCD)
Methode: luciferine, luciferase, O2, ATP → oxyluciferine + lichtemissie
Fluorescentie
Functie: via fluorescente kleurstof: detectie target mole (kan via immunofluorescentie)
via fluorescent proteïne: meten en lokalisatie genexpressie of activiteit promotor
in vivo
Methode: lichtabsorptie door fluorofoor => lichtemissie
1. FLIM
Levensduur aangeslagen toestand fluorofoor bepalen => OZ omgevingsfactoren
- Fluoroforen scheiden → meet hoe snel fluorescent signaal verzwakt
2. FRAP en FLIP
Meten diffusiesnelheid en mobiliteit in cel
- Bleaching regio => meet hoe snel signaal herstelt vs volledig verloren gaat
3. FRET
OZ moleculaire interacties inter- of intracellulair
- Overlap emissiespectrum donor - excitatie acceptor => E transfer => shift spectrum (E daalt)
Fluorescente microscopie
Functie: vergroten + contrast doordat structuur zelf licht uitzend
Methode: lichtbron => exciteren fluorescente moleculen => terugval grondtoestand => beeldvorming
Epi- vs confocale- vs 2-foton fluorescentiemicroscopie (van dun → dikke preparaten)
, UV/Vis spectroscopie
Functie: Kwalitatieve en kwantitatieve (concentratie) analyse eiwitten, DNA, …
Zuiverheid DNA
Methode: bindingselectronen absorberen fotonen => I licht daalt => I meten met PMT => A = ∆I
Spectrofluorimetrie
Functie: FACS, sanger sequencing, concentratie DNA bepalen, meten FRAP, FRET, FLIP, FLIM
Methode: licht: exciteert fluorofoor → terug naar grondtoestand: emissie licht → I meten met PMT
IR-spectroscopie
Functie: Kwalitatieve analyse (fingerprint): geeft vibraties (obv absorptie) van een mole weer
=> geeft polaire karakter binding weer
Methode: mole absorbeert fotonen => vibratie: geeft warmte E af aan omgeving => I licht daalt
=> meten verandering E (vibratieniveau) met IR detector
Raman scattering
Functie: geeft vibraties (obv verstrooiing) van een mole weer
=> geeft covalente karakter binding
Methode: laser (hoge I): E van licht => mole naar virtueel aangeslagen toestand: vervorming e- wolk
=> E verandert => meet verandering E (vibratieniveau) in verstrooide licht
NMR
Functie: structuuranalyse,
Methode: molecule in magnetisch veld: RF puls met juiste Lamorfrequentie van de H-kernen
=> verandering magnetisatie => meten relaxatie
Massaspectroscopie
Functie: scheiden + analyse deeltjes op m/z ratio
via harde ionisatie: kwalitatieve analyse (fragmentatie in functionele groepen)
via zachte ionisatie: kwantitatieve analyse + geeft MW van mole
Methode: ionenbron: laden moles → massa analyser: scheiden → detector: meten intensiteit
via continue dynode e- multiplier (hoornshape) of microchannelplate
Kolomchromatografie
Functie: scheiden stoffen + opvangen
Methode: op molecuulgrootte, affiniteit, adsorptie of lading
HPLC normaal (trager, minder R, grotere V) vs UPLC (korter, meer R)
→ evaporative light scattering of UV/Vis detector
GC met gepakte kolom (grote V, weinig R, lang) of capillaire (klein V, korter, gevoeliger)
→ TCD of FID
Combi massaspectroscopie en kolomchromatografie
- HPLC gecombineerd met ESI
- GC gecombineerd met CI of EI
Scheiding componenten mengsel via chromatografie
Massa analyse van de componenten met MS (bepalen structuur afzonderlijke componenten)
Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:
Bewezen kwaliteit door reviews
Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!
In een paar klikken geregeld
Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard en je bent klaar. Geen abonnement nodig.
Focus op de essentie
Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper paulinebal. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €12,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 67479 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen