Samenvatting
Samenvatting Werkzitting 1 immunologie
- Vak
- Immunologie
- Instelling
- Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
Werkzitting 1 immunologie
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 5 pagina's
Voorbeeld 2 van de 5 pagina's
In winkelwagen1 beoordeling
Door: xthundercloudx • 7 maanden geleden
Voorbeeld van de inhoud
Immunologie werkzittingIn labo: wat heb je nodig en hoe kan je eraan geraken
Vraagstelling:
Hoe kunnen humane monocyten/macrofagen na infectie bij een patiënt de antimicrobiële respons
versterken door neutrofiele granulocyten aan te trekken om de infectie te bestrijden?
Antwoord: In vitro methode voor dit na te gaan:
Met of zonder gebruik van m-o
Materiaal nodig voor experiment op te starten
1) Macrofagen en monocyten zuiveren:
uit humaan bloed (zitten in bloedbaan)
(bloedstaal bevat RBC, bloedplaatjes, plasma en WBC (monocyten))
=> zuivere monocyten
2) Je wil zien wat er bij antimicrobiële respons gebeurt: stof toevoegen voor stimuleren
Optie 1: MET gebruik m-o: toevoegen levende bacterie of virus aan monocyten
Optie 2: ZONDER gebruik m-O
G- bact: LPS toevoegen vs G+ bact: peptidoglycaan, flagelline vs virussen: dsRNA
=> liganden voor de tol-like-R
3) Je wil neutrofielen aantrekken => dit kan door chemokinen
=> dit moeten de monocyten produceren
Extra: bij muis:
kan macrofagen via peritoneum afnemen => hier zitten veel macrofagen
+: je kan in vivo werken: echte infectie van de muis: in het organisme doen)
Hoe bekom je de cellen en wat ga je er mee doen?
1. Zuiveren monocyten
Optie 1 : Isolatie PBMCs uit bloed:
=> werk met WBC, NK cellen, lymfo- en monocyten
1) Medium nemen bv. ficoll
2) Pipeteer hierop bloed
3) Centrifugeer 30min => °scheiding: onder RBC – granulocyten (zie je niet: zijn minder dan RBC)
– medium – witte band met PBMCs (WBC: lymfo- en monocyten, NK cellen) – plasma
1
, Optie 2 : zuiveren specifiek monocyten
=> dmv flowcytometrie cel per cel sorteren (langs laser) => traag)
dmv magnetische beads (snel)
positieve selectie: Ab’s tegen monocyten op magnetische beads bv. CD14
nadeel: kan dat beads een effect hebben op je mole
negatieve selectie: 1e zuiveren PBMC’s, dan gebruik Ab’s tegen lymfocyten en NK cellen
=> enkel monocyten lopen door (+: geen effect v/d beads)
Inductie experiment:
Kweek de cellen (monocyten) met bepaalde celconcentratie in 24 well plaat in groeimedium
=> incuberen cellen: 37°C (humane cellen), foetaal kalfsserum (met GF),
zoutoplossing (geen osmotische shok); buffer: CO2 incubator (stabiele pH) (24-48u)
=> toevoegen verschillende stoffen => stimuleren monocyten:
TLR liganden (G+, G-, virus)/cytokinen => microbiële respons
=> Cytokine 8 (IL8) (meest gemaakt door monocyten en meest actief) vrijgezet door monocyten
=> meet hoeveelheid geïnduceerd chemokine in bovenstaande vloeistof (na centrifugatie) met
immunologische test
2. Immunologische test gebruiken voor concentratie IL-8/ CXCL8
bepalen
Concentratie IL8 bepalen
welke test?:
ELISA (meest effectief), RIA, (in cyto kijken of IL-8 productie)
western blot (moeilijk voor juiste conc. bepalen, +: je ziet ook MW van eiwit)
maak schema met verschillende stappen (zie slide 11-14)
maak lijst met nodige materiaal en reagentia
hoe bekom je de reagentia?
Reagentia nodig voor de immunologische test: Ab’s nodig
Ab’s maken:
- Polyklonale Ab maken:
w gesecreteerd door meerdere klones Ag-specifieke B cellen
Immuniseer konijn meerdere x’en met Ag
met adjuvans (alum, CFA, poly I:C => sterkere respons)
=> proefdier bloed afnemen => Ab’s uit serum zuiveren: bloed laten stollen (cellen in stolsel)
=> °zuiver serum => affiniteitschromatografie:
ofwel covalent Ag (IL8) op kolom zetten (maar is duur, wel zeer specifiek)
ofwel matrix met proteïne A of G op kopen (alle Ab’s zullen binden => crossreactie,…)
voordeel: kan meerdere keren bloed nemen van 1 muis, Ab’s tegen ≠ epitopen,
polyklonaal Ab => agglutinatie en neerslag (immunoprecipitatie)
nadeel: ≠ bloedingen => Ab’s met ≠ affiniteit, crossactiviteit tgn ander Ag
2
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper paulinebal. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 79373 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen