ZEER uitgebreide cursus die ik zelf heb opgesteld omdat ik nood had aan een ordelijke en uitgebreide cursus om methoden 3 te kunnen studeren.
In dit document staat de informatie vanop de slides gecombineerd met de mondelinge uitleg die werd gegeven tijdens de hoorcolleges.
, 1. Sequentiebepaling
1.1. Edman degradatie
Werking:
Gezuiverd eiwit PITC aan toevoegen, bestaat uit 2 delen: aromatische ring (helpt achteraf de
detectie: absorbeert licht) en de reactieve chemische groep (bindt aan de amino terminus van een
eiwit door een nucleofiele aanval)
Dan pH verandering shuffling van elektronen uiteindelijk gaat het laatste aminozuur
afgesplitst worden van het eiwit en gaat hangen aan de aromatische groep die te meten is
HPLC (high performance liquid chromatography) doen elk AZ heeft een andere retentietijd: obv
dit kan je zien welk aminozuur afgesplitst is
Dit dan 50x doen
Zeer omslachtige sequentiebepaling; 40-60 AZ per peptide nu geautomatiseerd; eiwitsequenties
opgeslagen in databanken bv Swiss-Prot.
Sequentie dikwijls afgeleid van DNA-databanken. Meer en meer sequentiebepaling via massa
spectrometrie
1.2. Eiwit sequentiebepaling via massa spectrometrie
2 grote strekkingen: MALDI-TOF vs MS/MS
Beginnen met een gezuiverd eiwit (door kolomchromatografie of via 2D-gel dus scheiding volgens
lading en volgens massa)
Stap 1: Eiwit knippen met protease Bij voorkeur trypsine (alle peptides gaan 2 dezelfde ladingen
hebben):
o Endopeptidase trypsine knipt aan C-terminale zijde van Arg & Lys (hebben positieve lading)
alle peptides gaan dan eindigen met een positieve lading
o levert peptiden van ≤ 20 AZ
o peptiden hebben een C-terminaal basisch residu
o na ionisatie: 2 pos ladingen: NH2 terminaal en C-terminaal
eenvoudiger spectrum als alle peptiden een dubbele lading hebben (spectrogram:
rangschikking volgens massa)
29
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper leenhaegemans. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,49. Je zit daarna nergens aan vast.
