Samenvatting
Samenvatting Celcultuur en immunochemie: lesnota’s flowcytometrie
Lesnota’s over het deel flowcytometrie van het vak celcultuur en immunochemie.
[Meer zien]Voorbeeld 3 van de 19 pagina's
Voorbeeld 3 van de 19 pagina's
In winkelwagen
Voorbeeld van de inhoud
CELCULTUUR:FLOWCYTOMETRIE
Academiejaar 2018-2019
Bronnen:
Deze samenvatting is gebaseerd op de PowerPoint’s en lessen van Prof. dr. Nathalie Cools
Afbeeldingen afkomstig uit de PowerPoint’s van Prof. dr. Nathalie Cools
,LES 1
Enkele begrippen
- PARAMETER (verschillende betekenissen)
o Fysische of chemische eigenschappen van een cel
Cytoplasmic granularity or nuclear DNA content
o Fysische eigenschap, gemeten door een sensor
Light scattering or fluorescence
o Fysische eigenschap van een cel-geassocieerd reagens
Intrinsic/Extrinsic, afhankelijk of ze als dan niet gemeten kunnen met sonde
- EXCITATIE
o Proces waarbij optische energie geabsorbeerd wordt
- EXTINCTIE COEFFICIENT (ε)
o Efficiëntie waarmee optische energie geabsorbeerd wordt (afhankelijk v golflengte)
- EMISSIE
o Proces waarbij optische energie terug vrijgesteld wordt
- QUANTUM OPBRENGST(Q)
o Efficiëntie waarmee energie wordt vrijgesteld (0-1), meestal als fluorescentie
o Onafhankelijk van golflengte
- STOKES SHIFT
o Verschil in energie tussen excitatie en emissie golflengte max
- SPECTRUM
o Verdeling van excitatie en emissie golflengtes
Flow cytometrie - definitie
- Analyse van het woord:
o Flow = vloeistof
o Cyto = cel
o Metrie = meten
- Cytometry => fysische & chemische eigenschappen van cellen meten
- Flow cytometrie => hierbij worden metingen uitgevoerd terwijl cellen in een vloeistofsuspensie 1 voor 1
voorbij het meettoestel passeren
- Gebruik van flowcytometrie:
o Informatie over een celpopulatie verkrijgen
o + de verschillen in fysische & chemische eigenschappen tussen de cellen (=> de PARAMETERS)
o Gebeurt aan de hand van optische eigenschappen
- Flowcytometer (ruwe schets)
o Ruwe schets van wat er gebeurd:
Cellen in suspensie stromen als individuele partikels (1 voor 1) langs de laser (1 of meerdere
lasers)
Cellen gaan doorheen interrogatieunt (= waar laser de vloeistofstroom kruist)
o Belangrijk:
Cellen moeten een single cel suspensie vormen => 1 voor 1 lang de lichtbron
Cellen in die stroom brengen vereist hydrodynamische focussering
Individuele cellen verkrijgen
- Cellen/partikels in oplossing moeten erg klein zijn (0,2-150 um)
o Witte BC zijn bijvoorbeeld erg geschikt voor FCM
o Minder handig: biopten & tumorstalen
Hier: extra verwerkingsprocedure nodig (enzymatisch/mechanisch cellen dissociëren)
1
, Bouw flowcytometer
- Bevat steeds 3 delen
- Vloeistofsysteem (fluidics):
o = tank met vloeistof
o Zorgt voor transport van partikels/cellen in
vloeistofstroom naar de laser
- Optisch systeem (optics):
o Bestaat uit de laser -> aanstraling/excitatie van de
partikels
o Optische filters -> lichtsignaal naar juiste detector leiden
- Elektronica
o Zet lichtsignaal om in meetbaar elektronisch signaal
o Elektronisch signaal gaat verwerkt worden door de pc
Vloeistofsysteem
- Belangrijkste functie = transport van partikels
- 3 delen
o Sheath tank met geleidingsvloeistof
Zorgt voor hydrodynamische focussering
o Sample tube
o ‘Flow cell’
= hart van de flowcytometer
Daar: hydrodynamische focussering
- Druk:
o Druk sample hoger dan druk geleidingsvloeistof
o Druk op staal zelf ook groter dan druk op tank
- Optimale aanstraling gebeurt als:
o Celsuspensiestroom centraal in de laser ligt
o Maar 1 partikel/cel doorheen de laser gaat
- 2 belangrijke zaken zorgen ervoor dat cellen 1 voor 1 vloeien voorbij laser:
o Laminaire flow
o Hydrodynamische focussering
- Hydrodynamische focussering
o Doel = juiste oriëntatie van cel t.o.v. meetapparaat krijgen
Zorgt dat cellen 1 voor 1 aangestraald zullen
worden
o “Een hoog volume van het sample wordt in kleine
volume geforceerd in de flow cell”
Celsuspensie wordt “gespoten” in de
geleidingsvloeistof
Celsuspensie gaat in 1 rechte straal gaan
o Voorwaarde = laminaire stroom
Enkel als beide laminaire stroom hebben kan
je een vloeistof in een andere injecteren & gaan de vloeistoffen niet mengen
Wordt verkregen dankzij drukverschil in tube & tank
o Geleidingsvloeistof heeft grotere snelheid
Zorgt dat cellen 1 voor 1 zullen vloeien
Versnelt de suspensie -* partikels/cellen beperkt tot de centrale ruimte
- stroom laminair of turbulent? => getal van Reynolds:
o Formule: Re = d ρ v / η
d = diameter tube, ρ = vloeistofdensiteit, v = vloeistofsnelheid, η = viscositeit
o Bij Re < 2300 => laminaire stroom
2
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper biomed2017. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €0,00. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 67096 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen