,Hoofdstuk 1: prepareren en observeren
van cellen en weefsels
DOEL
Cellen en weefsels observeerbaar maken voor LM of EM
PROBLEEM
Biologische materiaal = te dik om licht door te laten
1.1 Gebruik van secties
= nodig om subcellulaire details waar te nemen
1. Fixeren
Weefselstuk weggenomen uit zijn normale situatie
o Afbraakenzymen actief
o Degradatie van het weefsel
Dit tegengaan door denaturatie van eiwitten
o Bevriezen
o Chemische fixatiemiddelen
Bevriezen
- Snel werken
- Bewaart epitopen beter voor imuunkleuringen
- Gebruikt in pathologische labo’s
Chemische fixatie
- Cross linken: met formaldehyde of gluteraldehyde
o Cel/weefselcomponenten blijven bewaard
- Neerslaan = percipiteren: met alcohol of aceton
o Structurele componenten worden bewaard
- Belangrijk = in vivo structuur bewaard blijft
- Veranderingen in weefsel = artefacten vb holtes
2
, 2. Inbedden
= gefixeerde middel moet met een substantie hard gemaakt worden
o Coupes te krijgen waar stralen door kunnen
o Niet als het al bevroren geweest is
- Inbedmiddel = hydrofoob
- Moet volledig binnendringen anders slecht snijdbaar
o Water eerst verwijderen met alcohol
o Clearing met tolueen = mengbaar met alcohol en inbedmiddel
LM paraffine Dikte 5-10 Stalen messen draagglaasjes
EM Hars en plastic 60-70 nm Diamanten messen Metalen roosters
1.2 Gebruik van kleuring
= gebaseerd op verschillen in affiniteit van kleurstof voor weefselcomponenten
o Coupes worden eerst gedeparafineerd met tolueen alvorens kleuring
a. Routinekleuring
= haematoxyline -eosine = HE
= bij PH 6
- Haematoxyline = blauw, kationisch +
- Eosine = oranje, anionisch –
o Kern = blauw
o Cytoplasma = oranje
o Blauw korrelig in cytoplasma = RNA
3
, b. Kleurbaarheid organische stoffen
Proteïnen
= aminozuren
= zure (COO-) en basische (NH3+) gropen
= overmaat hangt af van IEP en PH
o Bij PH 6 vooral +
o EOSINE
Nucleïnezuren
= DNA en RNA
= in kern
o HAEMATOXYLINE
Koolhydraten
= vaak verbonden met andere moleculen
= lossen op in waterig fixatief => gaan verloren
o Stof toevoegen die koolhydraten neerslaat
o Kleurbaar met cationische kleurstoffen
o Kunnen kleuromslag veroorzaken
= metachromasie in kraakbeen en mastcellen
Lipiden
= lossen op in alcohol
o Lege vlekken op LM
= fixatie met OsO4 bij EM
o Vetzuren bewaard bij fixatie + visualiseerbaar
c. Specifieke kleurtechnieken
Indifferente kleurstoffen
= kleuren vetten aan
= oil red O
Immunohistochemische kleuring
= kleuren specifieke bestanddelen aan op basis van
antigen/antilichaam binding
= antilichaam wordt voorzien van kleurstof
=DAB
Enzymkleuring
= activiteit aantonen
= gebruik van enzym specifiek substraat
= reactie = waarneembare neerslag
= G6PD kleuring
4
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper wonderkind. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €15,49. Je zit daarna nergens aan vast.