Chromatografie
Algemene inleiding
= Scheiding van mengsels in de verschillende componenten eventueel gevolgd
door kwalitatieve (identificatie) en/of kwantitatieve analyse.
2 fasen:
- Stationaire fase (SF): Vaste stof of vloeistof die vastzit in de kolom, plaat
of papier.
- Mobiele fase (MF): Gas of vloeistof die zich over de stationaire fase beweegt.
Componenten in mengsel: Verschillende affiniteit voor beide fasen
MF
Eluent
+ staal
SF Elutie A Best oplosbaar in/grootste affiniteit voor stationaire fase
→ Langst in kolom
B Best oplosbaar in/grootste affiniteit voor mobiele fase
→ Migreert snelst
Eluaat
Affiniteit voor een fase → Uitgedrukt als verdelingsevenwicht of
partitiecoëfficiënt
Voorwaarde voor scheiding: Componenten hebben een verschillend
verdelingsevenwicht
[𝐴]𝑠𝑓 [𝐵]𝑠𝑓
𝐾𝑎 = ≠ 𝐾𝑏 =
[𝐴]𝑚𝑓 [𝐵]𝑚𝑓
- Dynamisch
- Organische componenten: verschillende snelheid
Eigenschappen moleculen
Snelheid mobiele fase
Selectieve vertraging → Scheiding
Indeling naar aard mobiele fase:
- Vloeistofchromatografie (LC):
o Mobiele fase → Vloeistof
o Stationaire fase → Vloeistof (LLC)
→ Vaste stof (LSC: HPLC)
- Gaschromatografie (GC):
o Mobiele fase → Gas
o Stationaire fase → Vloeistof (GLC)
→ Vast (GSC)
+ Sneller
+ Scheiden van complexe mengsels
− Vluchtige stoffen: Staal moet om te zetten zijn naar gasfase
, Staalvoorbereiding
EXTRACTIE
- Isoleren doelwitcomponenten
- Concentreren
- Verwijderen interfererende componenten :
o Eiwitten → Enzymen, denaturatie
o Vetten → Lipasen
o Conjugaten → Verhitten bij lage pH, enzymen
Vloeistof – vloeistof extractie
Polariteit:
- Likes likes like
- Extractiebuisje of – trechter
Vaste fase extractie
= Voorbereiding: Opzuiveren bepaalde analieten uit een mengsel om deze erna
met een andere methode te analyseren
Analoog aan principes chromatografie:
o Selectieve verdeling over SF en MF
o Normal – en reversed phase
o Ionenuitwisselingschromatografie
Stappen:
1. Selectie kolom: Specifiek om bepaalde componenten af te zonderen
2. Conditionering kolom: MF laten doorlopen en kolom vochtig maken
3. Lading staal: Deels blijven hangen en deels doorlopen
4. Wasstap: Alles wat niet gebonden is verwijderen
5. Elutiestap: Alles wat wel gebonden is losmaken
6. Droogdampen: Concentratie verhogen
7. Eventueel derivatisatie: Chemische modificatie om stoffen bruikbaar te maken
voor verdere analyse
Toepassingen:
- Klinische chemie
- Minikolommen voor zuiveren DNA, RNA, GM
Standaardisatie
Voor kwantitatieve bepalingen: Standaard met gekende concentratie
Interne standaard → Meest accuraat
- Verschillend van analiet → Homoloog (fluctuatie opvangen)
Identieke fysische/chemische eigenschappen als analyt: detecteerbaar
- Toegevoegd aan staal = spiken
- Signaal interne standaard vergelijken met signaal staal
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper iamMLTer. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €2,99. Je zit daarna nergens aan vast.