Histologie practicum samenvatting
- Overzicht van biopt tot gekleurd preparaat
Fixeren
Inbedden
Snijden
Kleuren
Beoordelen resultaat
- Biopt = stukje weefsel van een persoon
1. FIXATIE
- Doel
biopsiefragmenten LM goed kunnen onderzoeken
vele en complexe structuren cel/weefsel kunnen onderscheiden
chemische bestanddelen: eiwitten, vetten, koolhydraten en zouten
morfologische cellulaire structuren behouden
- effecten
preventie van autolyse en putrefactie
Autolyse: afbraak cellen door enzymen > lysosomen
Putrefactie: afbraak t.g.v. bacteriële activiteit, vaak met gasformatie
behouden van cellen en weefselbestanddelen in zo getrouw mogelijke toestand
harden van weefsel
manipulatie van natuurlijke weke weefsel wordt mogelijk
brekingsindex stijgt cel en weefselcomponenten worden beter waargenomen
meer selectieve kleuring
ENKELVOUDIGE FIXATIEVEN
- Formaldehyde
gas, oplosbaar in water 40 % van zijn gewicht
verzadigde oplossing commercieel verkrijgbaar als formol (40% formaldehyde)
meest gebruikte fixatief meestal een 10% formoloplossing
geïncorporeerd in vele andere fixatieven
fosfaatbuffer: tegen oxidatie (formolpigment)
door oxidatie van formaldehyde ontstaat verzuring met vorming van
storend formolpigment toevoegen fosfaatbuffer
- Ethylalcohol
alleen: weinig nut, uitz.: bloeduitstrijkjes
penetreert traag, verharding duurt lang
samen met andere reagentia zoals Carnoy's vloeistof ® fixatie sneller
Effecten:
denaturatie van eiwitten
Precipitatie glycogeen
oplossen vetten
- Aceton: (niet meer gebruikt)
Werking analoog met ethanol, maar glycogeen niet goed bewaard
COMBINATIE VAN FIXATIEVEN
1
, - Alcoholische formol
opgebouwd uit:
formol 10 ml
90% alcohol 90 ml
wordt soms gebruikt voor de fixatie van KH
fixatie volledig na 6 tot 8 uur
- Carnoy’s vloeistof
samenstelling:
100% alcohol 60 ml
chloroform 30 ml
azijnzuur 10 ml
snelle penetratie
zeer goede kernfixatie met bewaring van het RER en glycogeen
veroorzaakt een belangrijke krimping en vernietigt meeste cytoplasmatische elementen
fixatie volledig in 1 tot 2 uur
fragmenten met d= 2 tot 3 mm: fixatie voltooid na 15 minuten
Bouin: bevat picrinezuur, wordt niet meer gebruikt vroeger vaak gebruikt maar nu niet
meer
2. Inbedding
- Na fixatie moet weefsel verhard worden om te kunnen snijden
- Soorten inbeddingmiddelen:
inbedding en impregnatie met gelatine:
ideaal voor harde biopsiefragmenten, zoals bot
inbedding en impregnatie met paraffine
Inbedding in plasticsoorten (harsen)
- Voor de routine lichtmicroscopie wordt als regel paraffine gebruikt
Paraffine inbedding (2 methodes)
- proces voorafgegaan door twee belangrijke stappen:
dehydratatie
het water wordt uit de weefselfragmenten gehaald door alcohol reeks
samengesteld uit een serie baden met stijgende alcohol concentraties
clearing
alcohol en paraffine zijn onderling niet mengbaar
Daarom tussen deze baden: intermediaire vloeistof wel met beide mengbaar
ethanol wordt vervangen door deze derde vloeistof
Wanneer het weefselfragment met een dergelijke stof geïmpregneerd, wordt
het transparant clearing
Soorten clearingmiddelen
chloroform: duurt lang
benzeen: toxisch
tolueen en xyleen: worden nog gebruikt voor immunokleuring
o kleine fragmenten “geklaard” in 30’ tot 60’ grotere fragmenten
in 2 tot 4 uur
o techniek is analoog als bij dehydratatie
Vervangmiddel voor tolueen en xyleen: vb. NEOCLEAR®: meest gebruikt
- impregnatie met vloeibare paraffine (manueel)
paraffine wordt verwarmd tot enkele graden Celsius boven zijn smeltpunt (60° Celsius)
het weefsel wordt hier dan ingebracht
2
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper emmavp2003. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,49. Je zit daarna nergens aan vast.
