100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na je betaling Lees online óf als PDF Geen vaste maandelijkse kosten
logo-home
Eerder door jou gezocht
Eerder door jou gezocht
logo
Samenvatting - Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1: hoofdstuk 8 €3,99
In winkelwagen
Snel navigeren naar
Voorbeeld
  2.  
  3. Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
  4.  
  5. Biomedische Wetenschappen
  6.  
  7. Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1

Samenvatting

Samenvatting - Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1: hoofdstuk 8
 0 keer verkocht

Samenvatting van hoofdstuk 8 uit het vak Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1. Dit hoofdstuk gaat over Bioluminescentie en Fluorescentie en hun toepissingen in het biomedisch onderzoek. Deze samenvatting heb ik gemaakt aan de hand van de slides en hoorcolleges.

Voorbeeld 3 van de 24  pagina's

Document informatie

  • 6 augustus 2023
  • 24
  • 2022/2023
  • Samenvatting

Onderwerpen

Geschreven voor

Alle documenten voor dit vak (40)

Verkoper

avatar-seller
laurebrants

Ontvangen beoordelingen

Voorbeeld van de inhoud

Hoofdstuk 8 Bioluminescentie/ Fluorescentie
1.8.1. Inleiding

Men gaat specimen zelf licht laten produceren: zodat men een beter contrast krijgen. Dit is het
tegenovergestelde van met een lichtbron doorheen het specimen schijnen (lichtmicroscopie).

 Hoog contrast (signaal tegen donkere achtergrond).
 Zeer specifiek contrast door gebruik van bv antilichamen.

 Meerkleurige merking => combinatie van verschillende soorten informatie.
 Beeldvorming in levende cellen / in vivo beeldvorming.

 Kwantitatieve beeldvorming (bv sensoren voor Ca-concentratie, pH, ...).
Bioluminescentie en fluorescentie zijn afgeleid van (micro-)organismes en diersoorten die licht
afgeven.
Licht wordt geproduceerd op basis
van een chemische reactie =
Bioluminescentie.




1.8.2 Bioluminescentie
1.8.2.1 Principe

Bioluminescentie gebeurt altijd met een substraat en enzymen (meestal luciferase).

,  Bij de aanwezigheid van zuurstof gebeurt er een oxidatie
van het substraat luciferine (met co-factoren).
=> Oxyluciferine wordt aangemaakt en komt in een
aangeslagen toestand terecht.
=> Terugkeer naar grondtoestand door vrijgave van licht.
=> Er is in zekere mate een oxidatie van luciferine maar
dat is een trage reactie.
=> Daarom hebben we een enzym nodig. Enzym luciferase
wordt gebruikt als katalysator.

 Zeer efficiënt reactie wat betreft lichtopbrengst: bijna alle
energie komt vrij in de vorm van licht tijdens de reactie.

Verschillende luciferine/luciferase combinaties mogelijk
=> bepaalt de kleur van het licht.

Men maakt een onderscheid tussen de land substraten en zee substraten (golflengte is korter dan
land substraten).

Bioluminescentie bij 90% van de diepzeedieren
Zee organismen gaan vaker gebruik maken van bioluminescentie. Het licht kan niet diep in het water
doordringen dus kunnen geen gebruik maken van fluorescentie.
1.8.2.2 In vitro metingen

Reactie van het substraat en enzym:
Vuurvlieg luciferase/luciferin

Drie zaken nodig voor licht:
 Luciferin

 Luciferase
 ATP

=>Lichtintensiteit/lichtopbrengst is afhankelijk van de concentratie van luciferin, luciferase en ATP.
We kunne verschillende tests ontwikkelen:

1. Een test die enkel afhankelijk is van de concentratie Luciferase waarbij en luciferin en ATP
toedient.

2. een test die afhankelijk is van de aanwezigheid van ATP. Luciferin en luciferase worden
beschikbaar gemaakt, dan hangt de reactie af van de concentratie ATP die beschikbaar is.

High Throughput Screening (HTS) assays kunnen gebruik maken van bioluminescentie om de
activiteit van bepaalde enzymen of biologische processen te meten.

Luciferase concentratie
Luciferase wordt gebruikt als een rapporteur gen om de activiteit van specifieke promotors of genen
te meten. Wanneer de promotor of het gen actief wordt, neemt de concentratie van luciferase toe
als gevolg van transcriptie. Daarna wordt luciferine toegevoegd, wat resulteert in lichtproductie die
afhankelijk is van de concentratie luciferase die is opgebouwd door de transcriptie van het
rapporteurgen.

, Dit proces kan worden gebruikt om genexpressie en post-transcriptionele regulatie te meten,
evenals intracellulaire gebeurtenissen die gekoppeld zijn aan genexpressie, zoals receptoractivatie,
signaaltransductie en cellulaire respons bij infectie of therapie.

Luciferine concentratie is niet direct gelinkt aan fysiologische parameter. Gebonden luciferine is niet-
actief.

We kunnen dus een test maken waarbij luciferine wordt vrijgemaakt door specifieke enzymen. Zodat
luciferine vrijkomt voor de reactie waardoor licht wordt geproduceerd. Het specifiek enzymen
bepaalt de concentratie van vrij luciferine
=> Bioluminescent signaal ~ enzymatisch werking.

ATP concentratie
Voor realtime bepaling van ATP gerelateerde activiteit

De bepaling van ATP-gerelateerde activiteit in levende cellen en organismen is een zeer gevoelige en
snelle methode om het celmetabolisme te meten met behulpt van bioluminescentie test assays.

Het kan worden gebruikt voor verschillende toepassingen:
 Het opsporen van bacteriële contaminatie in voedingsmiddelen en de gezondheidszorg,

 Het meten van cytotoxiciteit (waarbij de ATP-concentratie correleert met de cel viabiliteit).
 Het meten van de kinase-activiteit (waarbij de bioluminescentie afneemt naarmate er
minder ATP beschikbaar is voor fosforylering).
1.8.2.3 In vivo metingen

Om de concentratie van tumorcellen in vivo te kunnen meten,
worden specifieke tumorcellen getransfecteerd met het luciferase-
gen als reporter. Na expressie van het luciferase-gen zullen de
tumorcellen deze stof aanmaken, waardoor de concentratie van
luciferase in het lichaam gekwantificeerd en gevisualiseerd kan
worden.

Voor het meten van de luciferase-concentratie in vivo wordt een
dier geïmplanteerd met de tumorcellen. Na verloop van tijd zullen
de tumorcellen luciferase aanmaken. Om het geproduceerde licht te
meten, wordt luciferine toegediend aan het dier, waardoor er licht wordt opgewekt. Dit licht kan
vervolgens worden gemeten met een camera, waarbij een emissiefilter wordt gebruikt om een
specifieke golflengte door te laten.

De tumoren moeten zich vlak onder de huid bevinden, omdat het signaal anders mogelijk niet wordt
opgepikt. Dit komt doordat het licht verstrooid wordt door weefsel: je krijgt een vervaagd beeld en
een deel van het licht wordt geabsorbeerd. Het lichtsignaal is afhankelijk van diepte en intensiteit
van de bron.

Lichtdiffusie/absorptie doorheen weefsel


Optimale venster: licht minder
opgenomen door weefsel.

Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:

Bewezen kwaliteit door reviews

Bewezen kwaliteit door reviews

Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!

In een paar klikken geregeld

In een paar klikken geregeld

Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard en je bent klaar. Geen abonnement nodig.

Focus op de essentie

Focus op de essentie

Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper laurebrants. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,99. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 69052 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Start met verkopen
€3,99
  • (0)
In winkelwagen
Toegevoegd