Samenvatting
Samenvatting verlagen enzymologie
- Vak
- Enzymologie
- Instelling
- Artesis Hogeschool Antwerpen (Artesis)
verslagen enzymologie jaar 2 FBT
[Meer zien]Voorbeeld 3 van de 21 pagina's
Voorbeeld 3 van de 21 pagina's
In winkelwagen
Voorbeeld van de inhoud
PRACTICUM ENZYMOLOGIEMaaren De Houwer en Laura Dries
Doel:
Er wordt onderzoek gedaan naar inhibitoren. De inhibitor wordt bepaald (competitief of niet competitief) door
reactiesnelheden te vergelijken zonder en met inhibitor.
Eerst werd de bepaling van de maximale reactiesnelheden (Vmax) bij een continue en discontinue meting uitgevoerd,
de reactiesnelheidsconstante (k3) in functie van de enzymconcentratie ([E] in U/L) of de substraatconcentratie ([S] in
mM) bepalen. Het bepalen van de Michaëlis-Menten constante (KM) bij kamertemperatuur en bij constante pH-
waarde. Dit met behulp van spectrofotometrie (kinetisch programma).
Reacties:
- Reactie 1: vorming p-NA en Benzoyl-arginine door toevoeging van trypsine aan BAPNA
- Reactie 2: vorming p-NF en p-nitrofenolaat door toevoeging zure fosfatase bij pNPP
,Principe:
Analysemethode: spectrofotometrie met kinetisch programma
Bepalingsmethode: -standaardijklijn methode
-Hanes Woolf transformatie
Formules:
- Wet van Lambert-Beer: ! = $ % & % ' met: E = extinctie
e = molaire extinctiecoëfficiënt (L/mol.cm)
l = weglengte (cm)
C = concentratie oplossing (mM of U/L)
$
- (!"# = %&'(
met: Vmax = maximale reactiesnelheid (mol/L.min)
rico = richtingscoëfficiënt
∆*/!&,
- )= met: v = reactiesnelheid (mol/L.min)
-
ΔE/min = richtingscoëfficiënt
Ɛ= molaire extinctiecoëfficiënt (L/mol.cm)
/
- ). = [*]
met: v’ = reactiesnelheid’ (mmol/min.U)
V = reactiesnelheid (mol/L.min)
[E] = concentratie gebruikte enzym (U/L)
"
- *2 = 3 met: KM = Michaëlis-Menten constante (mM)
a = richtingscoëfficiënt
b = intercept met y-as
[4] [4].
- = met: v’ =
5. 5.
reactiesnelheid’ (mmol/min.U)
[S]’ = verdunde
substraatconcentratie (mM)
[7]
- +6 = ! met: Ki = dissociatieconstante inhibitor (mM)
8 " 9
!#$
[I] = concentratie inhibitor (mM
bi = intercept y-as van geïnhibeerd reactie
b = intercept y-as van niet-geïnhibeerde reactie
MEETRESULTATEN, GRAFIEKEN EN INTERPRETATIES:
BEPALING VAN DE MOLAIRE ECTINCTIECOËFFICIËNTEN VAN P-NF EN P-NA
De molaire extinctiecoëffieciënten van P-NF en P-NA werden bepaald omdat deze nadien nodig zijn voor
het bepalen van de reactiesnelheid van het enzym trypsine. De extinctiemetingen van een
verdunningsreeks van P-NA en P-NF werden hiervoor gemeten en uitgezet in functie van de concentratie
van het substraat. Aan de hand van de wet van Lambert-Beer kan op deze manier de extinctiecoëfficiënt
vastgesteld worden door de richtingscoëfficiënt van de ijklijn te bepalen.
, De molaire extinctiecoëfficiënt Ꜫ van p-NF is gelijk aan 45,75 L. mmol-1. cm-1.
De molaire extinctiecoëfficiënt Ꜫ van p-NA is gelijk aan 7,5141 L. mmol-1. cm-1.
De extinctiemetingen bevatten bij beide experimenten geen outliers. Wel is het belangrijk te vermelden
dat het experiment van de extinctiecoëfficiënt van P-NF weinig betrouwbaar is door de lage R2.
P-NF
Tabel 1: Extinctiemetingen van p-NF en outliers gemeten bij 410nm met de bijhorende concentratie in mmol/L voor de 10 verschillende
cuvetten. Outliers van de gemeten extincties van P-NF
Grafiek 1: De extinctie in functie van de concentratie van p-NF gemeten bij 410nm op kamertemperatuur met een ph van 5,6
Tabel 3:
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper lauradries1. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €4,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 79202 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen