Samenvatting - Labo microbiologie toets 1

LABO
LEVENSMIDDELENMICROBIO
2 BIOCHEMISCHE KENMERKEN

 Studie biochemische kenmerken van de kiem
= Goed inzicht in de activiteiten van de verschillende enzymen die een kiem kan bezitten,
hetzij intracellulair, hetzij exctracellulair

 Belangrijk dat de kiem kan groeien  voedingsbodem met een of meerdere extracten
Toevoeging van het substraat aan de voedingsbodem gebeurt meestal met de
voedingsstoffen
 alles samen wordt gesteriliseerd

 Beoordelen van biochemische testen:
 nagaan van de aan- of afwezigheid van het enzym (al of niet omgezet zijn van het
substraat na incubatie)
 nagaan van de vorming van een nieuw product uit het substraat

! Elke stofwisselingseigenschap is afhankelijk van een enzym, een micro organisme moet dus
een enzym hebben voor een bepaalde eigenschap !
 inzicht krijgen in welke enzymen je kiem bezit

 Voor aflezen van de testen adhv indicatoren of reagentia
 om metabolische processen zichtbaar te maken
 indien niet toxisch voor de kiem toegevoegd op moment van de bereiding
 indien wel toxisch voor de kiem toegevoegd na incubatie
 gebruikte indicatoren:
- Methylrood (pH-interval 4,4 rood – 6,2 geel)
- Broomcresolpurper (pH-interval 5,2 geel – 6,6 purper)
- Broomthymolblauw (pH-interval 6,0 geel – 7,6 blauw)
- Fenolrood (pH-interval 6,8 geel – 8,4 rood)
- Neutraalrood (pH-nterval 6,8 – 8)




1

,2.1 AANTONEN VAN ENZYMES (zuurstofbehoefte)
2.1.1 OXIDASE TEST

 De test maakt een onderscheid tussen de enterobacteriaceae die oxidase – zijn en de andere
gramnegatieven die oxidase + zijn

 Indien het co-enzym cytochroom C in de respiratieketen aanwezig is, kan dit aangetoond
worden met een kunstmatige e-donor (TPD)
 TPD geeft zijn e aan cytochroom C, wat daardoor in gereduceerde toestand komt, terwijl
het kleurloze TPD geoxideerd wordt tot Würsters blauw
 test wordt uitgevoerd adhv oxidase strips
 belangrijk om bacteriën te nemen die op een neutrale voedingsbodem zijn gegroeid!


CYTOCHROOM Paarsverkleuring Cytochroom C
OXIDASE +  TPD geeft zijn e aan aanwezig
cytochroom C, wat = obligaat aeroob
daardoor in
gereduceerde
toestand komt, terwijl
het kleurloze TPD
geoxideerd wordt tot
Würsters blauw

CYTOCHROOM GEEN paarsverkleuring Cytochroom C
OXIDASE - afwezig


2.1.2 KATALASE TEST

 De test geeft meer informatie over de zuurstofbehoefte en wordt gebruikt om onderscheid te
maken tussen fecale streptococcus spp en facultatief anaeroben zoals enterobacteriaceae en
stapthylococcus

 Katalase is een haemproteïne dat trivalent ijzer bevat als reactief bestanddeel
 enzym zet waterstofperoxide (3%) om in water en zuurstof
 Kiemen worden uitgesmeerd op een voorwerpglaasje en hierop brengt men een druppeltje
waterstofperoxide op

KATALASE + + Gasbellen (en evt Aerobe kiem
ook schuimvorming)
 enzym zet
waterstofperoxide om
in water en zuurstof
Facultatief aerobe
-/ + kiem
KATALASE - -geen gasbellen Anaerobe kiem



2

, +/- Facultatief anaerobe
kiem
2.2 ZUUR EN GASVORMING UIT EEN SUIKER / AFBRAAK VAN KOOLHYDRATEN
2.2.1 KIA TEST (Kligler Iron Agar)

 Deze test wordt gebruikt bij de identificatie van de enterobacteriaceae die steeds glucose
positief zijn

 Voedingsbodem: KIA en bevat de voedende bestanddelen + twee vergistbare suikers, glucose
1g/l en lactose 10g/l + natriumthosulfaat + ijzer(lll)ammoniumcitraat
 Indictaor = Fenolrood (pH-interval 6,8 geel – 8,4 rood en midden is 7,4)
 Aflezing:
Suikers worden als koolstofbron gebruikt vooraleer de AZ uit het pepton afgebroken worden,
omdat suikers gemakkelijk assimileerbaar zijn en meer energie opleveren
Pepton kan enkel aeroob afgebroken worden
o ENKEL GLUCOSE vergist is:
- Kleine hoeveelheid zuur gevormd (Fenolrood slaat om naar geel)
- Zodra glucose opgebruikt is en er geen lactose is, wordt pepton afgebroken
 AZ uit het pepton worden met de luchtzuurstof aan de tong oxidatief
gedeamineerd met vorming ammoniak en ketozuren, deze worden verder
afgebroken door de krebscyclus tot CO2 en H2O
 zure reactie aan de tong is dus maar tijdelijk
è RODE TONG EN GELE STOMP
o ENKEL LACTOSE vergist is:
- Lactose 10x meer geconcentreerd dan glucose , zure reactie is dus blijvend
è GELE TONG EN STOMP
o GLUCOSE EN LACTOSE vergist zijn:
è GELE TONG EN STOMP
o GASVORMING:
- Vorming van gasbellen in en/of onder stomp
o ZWARTE VERKLEURING:
- Kiem is sulfietreducerend of vormt H 2S uit zwavelhoudende AZ
- Sulfietreducerende kiemen verbruiken automatisch ook glucose




3