Samenvatting
Samenvatting - Practicum: biochemie en biotechnologie, PCR (J000496A)
Volledige samenvatting van Practicum PCR Leerpaden + powerpoints
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 5 pagina's
Voorbeeld 2 van de 5 pagina's
In winkelwagenVerkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
Practicum PCR DNA-profiel: DNA fingerprint
o DNA-profiel dat wordt verkregen, vergelijken met dat van de verdachte
Vingerafdrukken: dactyloscopie
‘match’ of ‘geen match’: verdachte wordt gelinkt of uitgesloten
DNA in de cel
In de kern = nucleair DNA/Genomisch DNA
Chromosomen
Uniek
In het cytosol = mitochondriaal DNA
Genomisch DNA
Coderend DNA (‘genen’)
Genetische informatie
Coderen voor eiwitten
Niet-coderend DNA (‘extra genetisch’)
Junk DNA
Grootste deel van het genoom
Geen fenotypische kenmerken
o Uitzondering: het geslacht
We zoeken naar regio’s in het DNA die verschillen tussen personen
Variabele regio’s in het
DNA = Short Tandem Repeats (STRs)
Identieke, repetitieve units
o Analyse van kleine fragmenten
Zeer polymorf
Merkers selecteren zover mogelijk van elkaar
in het genoom, op verschillende
chromosomen
Geslacht: Amelogenine merker op het
geslachtschromosoom: XX of XY
Locus: plaats op het genoom, waar de merker zich bevindt
Allel: varianten van een merker (aantal repeats)
Homozygoot: allelen op beide chromosomen zijn gelijk
Heterozygoot: Allelen van een bepaalde merker op beide chromosomen zijn verschillend
Opstellen DNA-profiel
, Cellen losweken van de dragen (bv. speekselcellen)
DNA extraheren uit de cellen mvb Chelex
o Chelex: hars, in de oplossing zullen minder ionen zitten
Osmotische kracht: cel neemt water op
Concentratie aan ionen in de cel daalt, en
wordt gelijk aan de concentratie van ionen
buiten de cel
Door de osmotische druk zal de cel barsten
Zachte lyse bij 56°C osmose (cellen komen allemaal op barsten te
staan)
Harde lyse bij kooktemperatuur openbreken cellen en denaturatie
van de proteïnen (DNA is vrijgekomen)
Vrijgekomen DNA beschermen voor afbraak door DNasen
o Afcentrifugeren: zware materiaal (bv. Chelex) op de bodem, DNA opgelost in de
waterige oplossing (= supernatans)
Goed scheiden want Chelex zal ionen capteren die het enzym tijdens de PCR
nodig heeft
DNA vermenigvuldigen adhv PCR:
o Detectie van de DNA-fragmenten mbv capillaire electroforese
o = DNA-amplificatie
o DNA-polymerase nodig (Taq)
Organisme dat bij kooktemperaturen overleeft,
polymerase zal niet denatureren
o Enkelstrengig DNA nodig als ‘template’ voor synthese van
complementaire nieuwe streng
o Klein stukje dubbelstrengig DNA nodig om de polymerase te
starten (primers toevoegen)
Cycli van denaturatie, annealing en elongatie
Denaturatie van een dubbelstrengige helix,
enkelstrengig DNA maken
Annealing: kleine regio’s met nieuw dubbelstrengig DNA wordt gemaakt
Hiervoor primers (enkelstrengig DNA) aangemaakt: zijn
complementair met fragment van template DNA
Temperatuur verlagen naar 58°C zodat enkel de primers kunnen
binden/hybridiseren op het DNA
Polymerase bindt op deze nieuw gevormde stukjes
Annealing T: primers binden = smelttemperatuur v. DNA
Smelttemperatuur v. DNA
o 50% primers gebonden aan DNA
o Afh. v. [C] en [G] gehalte (hebben 3 H-bruggen ipv. 2 H-
bruggen bij A en T)
o Hoe meer H-bruggen, hoe sterker de reactie, hoe meer
energie nodig, hoe hoger smelttemperatuur
Voor elk fragment bij het begin en einde een primer toevoegen
o Smelttemperatuur v. beide primers moet gelijk zijn zodanig
dat er geen aspecifieke bindingen kunnen plaatsvinden
o Tm te laag (tov. Ta) : geen annealing
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper marthevanlerberghe. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €8,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 67474 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen