Samenvatting
Samenvatting sv geintegreerd practicum voor het theorie examen
samenvatting van de inleidingsles en de notas
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 19 pagina's
Voorbeeld 2 van de 19 pagina's
In winkelwagenVerkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
geïntegreerd practicum: moleculaire biologie en geneticaexperiment I: sequentiebepaling van een onbekend gen.....................................................................................1
extractie van DNA met zoutprecipatie..............................................................................................................2
concentratiebepaling van DNA en lambda-faag DNA.......................................................................................2
controle van DNA zuiverheid en concentratie..................................................................................................3
PCR.....................................................................................................................................................................4
transformatie efficientie....................................................................................................................................5
ligatie PCR product in een t-tailed vector.........................................................................................................5
kolonie pcr.........................................................................................................................................................6
Principe plasmide bereiding..............................................................................................................................7
sequentiebepaling.............................................................................................................................................7
Experiment II: Genotypering van polymorfe DNA merkers – Segregatieanalyse.................................................9
genetische merkers...........................................................................................................................................9
gradient PCR......................................................................................................................................................9
paternaliteitsbepaling.......................................................................................................................................9
Analyseren van resultaten TPA 25 en VNTR D1S80........................................................................................11
experiment IIi: SNP of mutatie detectie..............................................................................................................12
Principe HRM en analyseren van resultaten...................................................................................................12
sybr gen...........................................................................................................................................................12
Taqman probes................................................................................................................................................12
smeltcurve.......................................................................................................................................................13
resultaten........................................................................................................................................................14
Experiment IV: Differentiële expressie hAPP in APP23 muismodel vs. controle.................................................16
QPCR................................................................................................................................................................16
Principe van Q-PCR en analyseren van resultaten..........................................................................................16
Experiment V: RPLF-PCR......................................................................................................................................19
Principe van RFLP-PCR.....................................................................................................................................19
EXPERIMENT I: SEQUENTIEBEPALING VAN EEN ONBEKEND GEN
1
, EXTRACTIE VAN DNA MET ZOUTPRECIPATIE
Als we onbekend gen willen detecteren nood aan DNA, we zullen dus DNA isolatie van elke
student uitvoeren
VERSCHILLENDE METHODEN OM GENOMSICH DNA UIT WEEFSEL TE ISOLEREN
§ Fenol-chloroform extractie:
• Veel gebruik
• Producten giftig voor mens en milieu
• Vaak gebruikt bij RNA
§ Extractie mbv zoutprecipitatie
• Veilig
• Gebruiken wij
§ Extractie via DNA isolatie kit met spin kolommen
• Weinig DNA opbrengst
STAPPEN
1. Mond spoelen met 0,8% NaCl om zo wangslijmvlies cellen te isoleren
2. Cellen collecteren via centrifugatie
§ 2 types
• Vaste rotor
• Swinging bucket minder kans hebben dat partikels naar de kant geduwd
worden (minder cellyse) cellen nog niet breken door een langere
sedimentatie afstand
3. Toevoegen lysisbuffer (10 mM Tris pH 8,0, 10mM EDTA, 0,1M NaCl, 2%SDS)
§ Om cellen open te breken daarna verwarmen waardoor de volledige inhoud van
de cel vrijkomt
4. Toevoegen proteïnase K + incubatie
5. Toevoegen verzadigd NaCl en centrifugatie
§ Zal de eiwitmantel rond de eiwitten verbreken en laten neerslaan
6. Supernatans bevat DNA neerslagen met Ethanol
§ DNA is heel negatief geladen dus zal verbonden blijven?
§ Ethanol = (organisch solvent)
§ Kijken (in het midden van het epje zal je zien drijven want DNA is heel viskeus, door
snelle draaiing lucht bellen, als we geen belletjes zien geen DNA of een zeer lage
concentratie) hoe beter opgelost hoe groter de waarde
7. Terug oplossen in TE-4 buffer
CONCENTRATIEBEPALING VAN DNA EN LAMBDA-FAAG DNA
Via spectrofotometrie
2
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper biomed124. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €7,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 56326 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen