Samenvatting
Self study summary Gibson Assembly and Gateway cloning
Self study summary Gibson Assembly and Gateway cloning
[Meer zien]Voorbeeld 2 van de 14 pagina's
Voorbeeld 2 van de 14 pagina's
In winkelwagenVerkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
Self study Genome technology & applications1. Gateway cloning
Site-specific recombination
Only at very specific sites
Strands bended to each other to facilitate exchange.
Learning outcomes:
1) Compare and contrast the steps of PCR cloning vs Gateway cloning.
2) List the properties of the att sites.
3) Design a recombinase reaction by appropriately placing the att sites on substrate and target
DNA.
4) Explain the significance of negative selection with ccdB.
1.1 Restriction enzymes vs Gateway
1
, PCR/restriction:
- Restriction enzymes used to create linear pieces of both gene of interest as well as the vector
- 2 linear pieces are rejoined using ligase
- Reseal DNA strand into a certain molecule
Recombination:
- Begins and ends with 2 circular DNA molecules
- Cut and ligated with the same enzyme
1.2 Target sequences for site-specific recombination
- Sequences all share a common central region (black)
- Unlike restriction enzyme sites: sites are not palindromic
- Always pair together: B-P and L-R (left and right)
- Reversal reaction can occur but one enzyme will only go in one direction
- LR clonase, if you want to reverse reaction: use BP clonase instead
- Clonase enzyme cuts central region asymmetrically, generating transient sticky ends, similar
to our restriction enzyme
- After strand swapping: central regions will anneal and ligate into new product site
2
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper charlottegevaerts. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €4,49. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 47561 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen