Celbiologie WPO examen
WPO 1 – Inleiding + lichtmicroscoop
Lichtmicroscoop
Köhler belichting
1. Lichtschakelaar aanzetten
2. Preparaat in de houder plaatsen & lokaliseren van het weefsel (5x)
3. Scherpstellen beeld
4. Velddiafragma bijna dichtdraaien
5. Condensor en focus samen scherpstellen
6. Centreren van de diafragma-lichtvlek
7. Velddiafragma opendraaien tot veld juist belicht is
8. Contrast regelen met het apertuurdiafragma
9. Bij hogere vergroting – stappen herhalen
Vervaardigen van preparaten
Waarom? Weefsel is weinig doorlatend en heeft weinig contrast
Doel: cellen & weefsel observeerbaar maken voor LM/EM
Methode
1. Fixen van het weefsel
Doel:
Weefsel vastleggen in de in vivo toestand →behoud oorspronkelijke
structuur
Beschermen van weefsel tegen autolyse, anoxie en microbiele
aantasting
Methodes
- Fysiche fixatie (vloeibare stikstof)
- Chemische fixatie (formaldehyde, osmiumtetroxyde, …)
o Immersie = onderdompelen
o Perfusie = van binnenuit
2. Inbedden
In inbedmiddel (bv. Parafine) – weefsel wordt hard
3. Snijden in plakjes
- Door middel van een microtoom of
Vriesmicrotoom: voor vriescoupes waarbij weefsel zelf niet
ontdooit -> snel maken
Nadeel: delen van weefsel gaan kapot en morfologie is slechter
- Manier van snijden hangt af van het weefsel en geeft een ander
beeld
4. Kleuren / contrasteren
- Kleurstoffen
- Antilichamen
Vriescoupes maken →belangrijk in de pathologie
Celbiologie – WPO examen
2
, Paraffine- / eponcoupes maken →belangrijk in de histologie:
Chemische fixatie door immersie of perfusie → dehydratatie weefsel (70-90-100%
alcohol)
→ alcohol = oplosmiddel voor inbedmiddel
→ inbedden in: paraffine of metacrylaat (LMS)/ epon of metacrylaat (EMS)
→ uitharden inbedmiddel: paraffine → T↓; epon → T↑ → coupes snijden
→ coupes depraraffineren en rehydrateren → coupes kleuren →coupes
dehydrateren, klaren en monteren
Preparaten van celsuspensies
- Maken van een uitstrijkje (vb. voor bloedcellen)
- Bloed volledig uitstrijken en onder microscoop bekijken
- Cytospintechniek (vb. witte bloedcellen) => let op morfologie wordt
aangetast
- Vervaardigen van een celpellet (verwerken als weefsel)
➔ Door niet te centrifugeren gaan alle celsuspensies naar beneden zakken
en de celpelletn vormen.
Toepassingen van de microscoop
Histologie
=bestuderen van weefsels
- Normale weefsels en pathologie
- Gebruik van kleuringen
- Bv. Lever
(centraal bloedvat is omringd door membraan en sinusoïde (groeve
gemaakt door hepatocyten) niet)
Celkweek
- Cellen worden gekweekt door experimenten
- Deze cellen zijn kleurloos (met kleurstoffen gaan ze dood) ->
fasecontrastmicroscoop
- Volgt de groei van cellen
Digitale beeldacquisitie
Digitale camera gekoppeld aan PC capteert beelden
Image analyse software laat toe om metingen uit te voeren:
- Telleningen van levende/dode cellen
- Bepaling van de zuiverheid
- Meten van oppervlak
Verschillende configuraties bestaan:
- Live cell imaging
= incubator om preparaattafel (live celkweek volgen)
- 3D imaging
= module in software
- Video microscopie
= Time-lapse module + motorized stage
Gevaar: fout conclusies trekken door andere beelden (fotoshop)
Celbiologie – WPO examen
2
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper louccaloucca. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,49. Je zit daarna nergens aan vast.