1. Doel
- Weefsels + organen observeerbaar maken voor LM of EM
- LM kleur
- EM zwart-wit
2. Problemen
- Weinig contrast in biologisch materiaal kleur nodig
- Weinig licht( = elektronen) doorlatend te dik
3. Methodes
3.1 Fixatie
- Bewaren van weefsel met behoud van oorspronkelijke structuur = denatureren van eiwitten =
3D structuur gaat verloren stilleggen van bacteriële en autolytische afbraakreacties
o Anders zou het weefsel rotten
- Permeabiliseren van celmembraan gaten in membraan maken zodat kleurstof en
chemische fixatie erin kan
o Soms wordt het membraan daardoor vloeibaar
- Maakt weefsel harder + poreuzer
1
, o Nodig zodat je dunnen coupes kunt snijden
- Soorten fixatie
o Chemische fixatie
Immersie = onderdompelen
Perfusie = in bloedvaten spuiten
Alcoholen
Ethanol eiwitten doen neerslaan + ze worden onoplosbaar =
precipiterend fixatief
Glutaaraldehyde, formaldehyde eiwitten gaan crosslinken=
crosslinkende fixatief eiwitten zitten aan elkaar vast dus werking
wordt stilgelegd
Andere: azijnzuur, osmium tetroxide
o Koude fixatie
Invriezen van weefsel
Gaat sneller maar minder dunnen coupes
- Artefacten verandering die tijdens de fixatie ontstaan in een weefsel en dus afwijken van
de in vivo situatie
- Hoe groter het weefsel hoe langer het in het fixatief moet zitten
3.2 Inbedden
- Inbedmiddel
o Substantie die in weefsel dringt
o Moet eerst vloeibaar zijn en dan hard
o Materiaal snijdbaar in dunne coupes
o Bv paraffine/ kaarsvet , hars, plastics
Verharden door polymerisatie
o Zijn hydrofoob eerst weefsel dehydrateren
Breng weefsel telkens in ethanol met stapsgewijs met een stijgende
concentratie: 30° 50° 70° 90°
- Clearing
o Gebeurd in tolueen bindt zowel met ethanol als het inbedmiddel
- Infiltratie weefsel wordt geplaatst in het vloeibaar inbedmiddel
- Inbedden verharden van inbedmiddel in weefsel
- Trimmen wegsnijden van inbedmiddel zodat je mooie coupes kunt maken
3.3 Snijden
- Dankzij hardheid van het inbedmiddel kun je het weefsel in dunne coupes snijden
- Microtoom= apparaat waarmee je de coupes kunt snijden
- Paraffine
o 1-20µm 5µm
o Doorlaatbaar voor licht LM
o Microtoom met stalen mes
- Hars & plastics harder dan paraffine
o 50 nm – 2µm: half dunne coupes
LM
Microtoom met glazen mes
Meer details
o 60- 100 nm 70 nm
2
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper beexxx. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €2,99. Je zit daarna nergens aan vast.
