Tentamen (uitwerkingen)
EXAMENVRAGEN + OPLOSSINGEN GIP
- Instelling
- Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
Geen tijd om te leren voor dit vak? Geen probleem, leer deze vragen en je bent gegarandeerd erdoor!
[Meer zien]Voorbeeld 3 van de 16 pagina's
Voorbeeld 3 van de 16 pagina's
In winkelwagenVerkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
Examenvragen + oplossing GIPBespreek de belangrijkste kenmerken van het pUC19 plasmide (tekening plasmide gegeven) + hoe
weten we dat de transformatie van competente E.coli cellen met dit plasmide gelukt is? + wat verstaan
we onder blauw/wit selectie bij klonering in het plasmide? (5 punten)
(handleiding p30)
pUC19:
Belangrijkste elementen:
1. ORI: startsite replicate plasmide
2. AmpR: beta-lactamase breekt beta-lactamring van Amp (agar) af -> geen functioneel Amp
3. LacZalfa: N-terminus van LacZ gen = reportergen
Tranformatie LacZalfa gen in bacterie met lacZbeta deel -> volledig LacZ gen -> functioneel
beta-galactosidase. IPTG induceert de lac promotor voor aanmaak beta-galactosidase, leaky
expression kan plaatsvinden.
X-gal wordt afgebroken door beta-gelactosidase -> blauw precipitaat
Transformatie gelukt? Bacterie groeit op agar met Amp, witte kolonies op agar zonder X-gal, blauwe
kolonies op agar met X-gal
Blauw/wit selectie: MCS met aantal restrictie sites aan het begin van LacZ gen. Insertie van een ander
gen in LacZ mbv. restrictie digestie -> niet-functioneel beta-galactosidase -> X-gal wordt niet
afgebroken -> witte kolonies waar transformatie heeft plaatsgevonden (enkel bij pUC19)
,bespreek de belangrijkste kenmerken van het pGLO plasmide (tekening van plasmide wordt gegeven
+ ook afbeelding van de werking van het ara operon) + Hoe weten we dat de transformatie van
competente E. coli cellen met dit plasmide gelukt is? + bespreek de rol van het ara operon in de
expressie van GFPuv
(handleiding p31)
pGLO:
Belangrijkste elementen:
1. ORI: = origin of replication
2. AmpR-gen: codeert voor B-lactamase. Dit breekt de B-lactamring van ampicilline af, waardoor
ampicilline zijn werking verliest.
3. GFPuv-gen: fluorescerend groen onder UV-licht = reportergen, wordt afgeschreven na PBAD
promotor
4. PBAD: induceerbare promotor voor het GPVuv gen
5. araC: codeert voor AraC proteïne = repressor PBAD, RNAP zal niet kunnen binden op PBAD
Arabinose bindt AraC -> conformatieverandering AraC -> bindingsplaats voor RNAP op DNA
komt vrij -> GFPuv wordt afgeschreven
Transformatie gelukt? Bacterie groeit op agar met Amp, witte kolonies op agar zonder arabinose,
groene kolonies onder UV-licht op agar met arabinose.
, oefening zuiverheid DNA: absorbantie bij 260 en 280 nm gegeven en DNA/RNA bepalen en
concentratie nucleïnezuren (er zijn geen proteïnen in het mengsel aanwezig)
(handleiding p40-41)
a260/a280
~1,8 -> zuiver DNA
~2 -> zuiver RNA
Als verhouding lager is -> aanwezigheid van contaminanten die sterk absorberen bij 280 nm
Als er geen proteine zijn kunt ge dees ni gebruiken
%P + %N = 100
Voor 1 mg/ml DNA: a260,n=20 en a280,n=10
Voor 1 mg/ml eiwitten: a260,p=0,57 en a280,p=1
-> 2 vergelijkingen en 2 onbekenden
(%= 1g/100ml)
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper Sciencestudent123. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €2,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 56326 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen