Samenvatting
Samenvatting Biomoleculen
- Instelling
- Universiteit Gent (UGent)
Samenvatting Biomoleculen
[Meer zien]Voorbeeld 3 van de 27 pagina's
Voorbeeld 3 van de 27 pagina's
In winkelwagen
Voorbeeld van de inhoud
2022-2023 Biomoleculen: analyse en scheiding Amelia HajnusBiomoleculen: analyse en scheiding
Deel 1: Proteïne-opzuivering
Wat zijn proteïnen ?
Belangrijke aminozuren:
pH < pKa: zijketen geprotoneerd
pH = pKa: helft geprotoneerd, helft gedeprotoneerd
pH > pKa: zijketen gedeprotoneerd
Primaire structuur eiwit: AZ sequentie
Secundaire structuur eiwit: α-helix en β-vouwblad
H-bruggen
Tertiaire structuur eiwit: disulfidebinding, ionische binding, H-bruggen, hydrofobe interacties
Quaternaire structuur eiwit: verschillende peptiden interageren
dimeren, trimeren, tetrameren,…
Posttranslationele modificaties: toevoeging nieuwe functionele groepen
Iso-elektrisch punt (IEP of pI): pH waarbij het proteïne geen netto positieve of negatieve lading heeft
2D-polyacrylamidegelelektroforese
Scheiding op basis van moleculair gewicht en pI
Hydrofobiciteit vs. Hydrofiliciteit: hydrofobe eiwitten aan binnenkant → membranen
1
,2022-2023 Biomoleculen: analyse en scheiding Amelia Hajnus
Absorptie door een eiwit
Absorberen licht bij 280 nm: tyrosine, tryptofaan en disulfidebruggen
! phenylalanine niet
Totale absorptie hangt af van extinctiecoëfficiënt ε [1/M cm]: wordt groter naarmate meer trp/tyr/S-S
Wet van Lambert-Beer: A = C * ε * L
C: concentratie [M]
L: lengte cuvet [cm]
Proteïne-opzuiveringstechnieken
Oplosbaarheid
Balans geladen, polaire en hydrofobe AZ aan oppervlak eiwit bepaalt oplosbaarheid
In neutrale zoutoplossing of organische solventen: proteïnen precipiteren/neerslaan in een bepaald bereik door
een lage oplosbaarheid
Ruwe manier op te fractioneren in ‘oplosbaarheidsfracties’
Zuiver proteïne verkrijgen onmogelijk doordat de oplosbaarheidsbereiken overlappen
Ammoniumsulfaatprecipitatie
= salting out
Proteïne in bufferoplossing is zeer sterk gehydrateerd: geladen groepen aan oppervlak trekken watermoleculen
aan en binden ze sterk
Toevoeging veel zout: zoutionen trekken watermoleculen weg van proteïne-oppervlakte (doordat ionen een
hogere ladingsdensiteit hebben) proteïne-moleculen gedwongen met elkaar te interageren + aggregeren
Elk proteïne begint te precipiteren vanaf bepaalde zoutconcentratie zonder dat hij denatureert
Pellet: precipitaten collecteren via centrifuge
Supernatans: bevat oplosbare deel
Doel: proteïne-mengsels fractioneren of concentreren
2
, 2022-2023 Biomoleculen: analyse en scheiding Amelia Hajnus
Lading
Verschillende oppervlakteladingen (afkomstig van glu, asp, his, lys, arg) die pH afhankelijk zijn → pI proteïne
Ionuitwisselaars
Ionenuitwisselaars: scheiden negatief geladen (anionen) en positief geladen (kationen) proteïnen volgens
gradiënt
Anionuitwisselaar Kationuitwisselaar
+ geladen hars/resin - geladen hard/resin
Bindt anionen Bindt kationen
Doorloop kationen Doorloop anionen
Elueren = gebonden ionen losmaken d.m.v. zoutoplossing
Eluaat = wat vrijkomt na stijging zoutconcnetratie
NaCl heeft grotere ladingsdensiteit → verdringt gebonden eiwitten → minst sterk gebonden eiwitten elueren
eerst bij laagste c(NaCl)
Elueren kan ook d.m.v. pH-gradiënt
Soorten:
1) Beads in oplossing: discontinue metingen met spectrofotometer
2) Zelf-bereide kolom startende van een slurry: discontinue metingen met spectrofotometer
3) Prepacked kolom: real-time monitoring
4) Chromatografiesystemen
Gradiënt elutie
Chromatogram:
x-as: volume dat over uitwisselaar is gelopen uitgedrukt in kolomvolumes
y-as: blauw = absorptie bij 280 nm als maat voor eiwitten die de kolom passeren
rood = c(NaCl) waarmee geëlueerd wordt
3
Dit zijn jouw voordelen als je samenvattingen koopt bij Stuvia:
Bewezen kwaliteit door reviews
Studenten hebben al meer dan 850.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet jij zeker dat je de beste keuze maakt!
In een paar klikken geregeld
Geen gedoe — betaal gewoon eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard en je bent klaar. Geen abonnement nodig.
Focus op de essentie
Studenten maken samenvattingen voor studenten. Dat betekent: actuele inhoud waar jij écht wat aan hebt. Geen overbodige details!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper BrentUGent. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €2,99. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 64257 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen