Samenvatting cytologie
cel II (LM)
1. Lichtmicroscopie
1.1 Overzicht
Resolutie: 200 nm (= kleinste afstand waarmee 2 punten nog
net gescheiden worden weergegeven) bepaald door:
o Objectief
o Golflengte van zichtbaar licht
Effectieve resolutie mede bepaald door natuur preparaat:
o Gefixeerd en gekleurd (hematoxyline/eosine)
o Levend met doorgaans te weinig contrast
Vergroting: product van oculair (10x) en objectieflens (4,10, 40,
100x) -> max. 1000x vergroten
1.2 Opstelling (Klaar-veld)
Meeste preparaten worden in LM bekeken met doorvallend wit licht
Bestaat uit 3 lenssystemen:
Condensor: bundelt het doorvallend licht op preparaat
Bepalen: lichtsterkte,
Objectief: kijkt met zeer korte werkafstanden naar preparaat (vergroot beeld)
resolutie, kwaliteit
Oculair: beeld navergroten en op retina projecteren
+
Verstelbare tafel
Prisma: lichtweg buigen voor comf zitpositie
1.3 Speciale lichtmicroscopen voor levende cellen
Fasecontrastmicroscopie
o Basis van faseverschuiving van licht
o Kleine faseveranderingen, ontstaan door brekingsverschillen in preparaat ->
amplitudeveranderingen (licht/donker)
o Toegepast op ongekleurde preparaten (gekweekte levende cellen of vriescoupes)
Differentieel interferentie-contrastmicroscopie (DIC / Nomarski)
o Basis van +/- interferentie van gepolariseerd licht
o 3D beeld levende cellen
Digitale microscopie
o Computerverwerking van beelden met ultragevoelige videocamera’s
o Dynamisch
Donkerveldmicroscopie
o Kleine objecten (bacteriën, organellen)
(fluorescentie)microscopen
o Zie verder
o Life cell imaging
, 1.4 principes lichtmicroscopie
Contrast verhogen
o Met kleuring:
Histologische kleuring: reduceert amplitude van bep. λ -> kleuring
o Zonder kleuring:
Verschillen in optische dichtheid -> beeldcontrast
Afwijkende brekingsindex -> faseverschuiving
Interferentie (+/-): zwart-wit beeld
1.5 voorbeeld lichtmicroscopische analyse
Kleuring darmvillus met
PAS (Periodic Acid Shiff) -> vrije suikers
Hematoxyline -> nucleïnezuren
Eosine -> NH2 groepen van EW
1.6 Fluorescentiemicroscopie
Epi-illuminaite = meest gebruikte illuminatiesysteem
Objectieflens + condensor + objectief in 1
Epifluorescentie
Activeert met excitatielicht van korte λ (ultraviolet-blauw, groen)
Fluorchrome stof in preparaat zendt emissielicht uit van langere λ (resp. groen, rood-
infrarood)
Conventioneel (met kwikdamplamp als lichtbron)
Confocale laser scanning microscopie (CLSM) (met laser als lichtbron)
1.6.1 Principes:
1. Excitatiebron: Hg of Xe lamp
2. λ – filters in een filterkubus:
Excitatiefilter
Dichroïsche spiegel (beamsplitter)
Emissiefilter of stopfilter
3. Detector: ogen of camera
fluorocroom: bv. alexa 488 (liefst aanslaan met λ 488 nm, mr je kan niet 1 λ doorlaten (je laat
bv enkel 450 tot 550 nm door), vervolgens 2 e filter: laat enkel licht toe van > 515nm alexa 488
w zichtbaar
1.6.2 Gebruik:
Aankleuren en kwantificeren
o Ion-gevoelige kleurstoffen: fluorchroom reageert met ion, kleur op basis van
concentratie ion (bv fura-2 met Ca2+ )
o Immunofluorescentie: EW detecteren mbv Ig’s gebonden aan fluorchroom
o Tagging van EW met fluorescente EW (spec EW in levende cellen detecteren)
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper StudentjeGeneeskunde1. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €3,99. Je zit daarna nergens aan vast.
