Samenvatting
Samenvatting biotechnologie
- Vak
- Biotechnologie
- Instelling
- UC Leuven-Limburg
Ik heb deze samenvatting zelf geschreven, afgeleid uit de cursustekst en powerpoint. Voor mij was deze samenvatting voldoende om te studeren. SUCCES
[Meer zien]Voorbeeld 4 van de 122 pagina's
Voorbeeld 4 van de 122 pagina's
In winkelwagen
Voorbeeld van de inhoud
BIOTECHNOLOGIE2023-2024
FARMACEUTISCH EN BIOLOGISCHE LABORATORIUM TECHNOLOGIE
,Lowie Boels Biotechnologie
1. Recombinant technologie en vector systeem .......................................................................7
1.1. Basisprincipe van de recombinant DNA technologie .................................................7
1.2. Biologische gastheren in moleculaire biotechnologie ................................................7
1.3. Ontwikkeling van een vector .....................................................................................7
1.4. Enzymen betrokken bij klonering...............................................................................8
1. Restrictie enzymen (RE)............................................................................................8
2. Ligatie van vector met insert DNA ........................................................................... 10
3. Fosfatase enzymen ................................................................................................ 10
4. DNA ligasen ........................................................................................................... 11
1.5. DNA inbreng methode voor gastheercellen ............................................................. 11
1. Chemische inbrengmethode: CaCl2-hitte transformatie ......................................... 11
2. Fysische inbrengmethode: DNA elektroporatie ........................................................ 12
3. Opgroeien/herstel van de getransformeerde cellen ................................................. 12
1.6. Kolonie screening en selectie merkers .................................................................... 13
1. Werking van transpeptidase ................................................................................... 13
2. Werking van ampicilline ......................................................................................... 13
3. Werking van tetracycline ........................................................................................ 14
4. Werking chlorampfenicol ....................................................................................... 14
5. Gebruik van auxotrofe selectie ............................................................................... 15
1.7. Courante kloneringsvectoren .................................................................................. 15
1. pBR322.................................................................................................................. 15
2. pUC18/19 kloneringsvector .................................................................................... 16
2. Nucleïnezuur scheidingstechnieken ........................................................................... 19
2.1 Algemene principes nucleïnezuur opzuiveringstechnieken ...................................... 19
2.2 Chromosomaal DNA isolatie uit prokaryoten ........................................................... 19
1. Pelletisering ........................................................................................................... 19
2. Het ruwe celextract ................................................................................................ 20
2.3 Opzuivering van DNA uit het ruwe extract ................................................................ 22
1. Overzicht van de 3 methode voor de opzuivering ..................................................... 22
2. uitzouten van eiwitten ............................................................................................ 22
3. Fenyl-chloroform-isoamylalcohol extractie = organische extractie ........................... 22
4. Silica gel gebaseerde spin kolommen = solid phase extraction ................................. 24
2.4 Plasmide DNA isolatie uit prokaryoten .................................................................... 24
2.5 Eukaryote genomische DNA-isolatie ....................................................................... 25
1. Extractie uit bloedstalen ......................................................................................... 26
2. Extractie uit weefsel ............................................................................................... 26
1
,Lowie Boels Biotechnologie
2.6 Nucleinezuur opzuivering door kolomchromatografie .............................................. 27
1. Anion uitwisselingschromatografie ......................................................................... 27
2. Grootte exclusie chromatografie ............................................................................. 28
3. Solid phase reverse immobilisation beads .............................................................. 28
2.7 RNA opzuiveringstechnieken .................................................................................. 29
2.8 Kwantificatie van DNA en RNA ................................................................................ 30
1. Kwantitatieve bepaling door UV absorptie ............................................................... 30
2. Nanodrop .............................................................................................................. 31
3. Qubit fluorometer .................................................................................................. 32
2.9 Fysiochemische eigenschappen van DNA ............................................................... 33
1. Denaturatieproces van een DNA duplex .................................................................. 33
2. Smeltgedrag en smeltcurve .................................................................................... 33
2.10 Gel elektroforese van nucleïne zuren ...................................................................... 35
1. Soorten gels........................................................................................................... 35
2. Loading dye ........................................................................................................... 36
3. Visualisatie van DNA en RNA moleculen ................................................................. 37
4. Fotografie en gel scanners ...................................................................................... 37
2.11 Kwantificatie DNA en RNA ...................................................................................... 38
1. Conformatie van plasmide DNA in gel-elektroforese ................................................ 39
2. RNA gel elektroforese ............................................................................................. 39
2.12 Capillaire gel elektroforese ..................................................................................... 40
1. Opstelling .............................................................................................................. 40
2. Werking ................................................................................................................. 41
3. Directe detectie door UV absorptie ......................................................................... 41
4. Detectie door LIF ................................................................................................... 41
5. CGE analyse van DNA ............................................................................................ 42
6. Microcapillaire elektroforese (MCE) ........................................................................ 42
2.13 Recuperatie van nucleïnezuren uit de gel ................................................................ 42
3. Polymerase chain reaction (PCR) ................................................................................ 43
3.1. essentiële componenten en PCR-reactiestappen .................................................... 43
3.2. Kritische factoren bij het uitvoeren van PCR ............................................................ 44
1. Controles .............................................................................................................. 44
2. Oorzaken van contaminatie en preventiemaatregelen ............................................. 44
3.3. Cycli aantal – plateau effect ................................................................................... 44
3.4. Thermostabiele DNA polymerasen.......................................................................... 44
3.5. De primerparen...................................................................................................... 45
2
, Lowie Boels Biotechnologie
1. Keuze van de primers ............................................................................................. 45
2. 5’ adaptor primers .................................................................................................. 46
3. De annealingstemperatuur Ta van een primer .......................................................... 46
3.6. Het reactiemidden – de Mg2+ concentratie ............................................................. 47
3.7. De matrijs .............................................................................................................. 47
3.8. Restriction fragment lenght polymorphism & PCR (RFLP – PCR) .............................. 48
3.9. Multiplex PCR ........................................................................................................ 48
1. In detectie van pathogene infectie .......................................................................... 48
2. Multiplex PCR in detectie vajn populatie neushoorns in azie en afrika ...................... 48
3. Multiplex PCR in microbioom analyse ..................................................................... 49
3.10. Aspecifieke amplicons ....................................................................................... 50
3.11. Verhoging van de PCR specificiteit ...................................................................... 50
1. Cold start PCR ....................................................................................................... 50
2. Hot start PCR ......................................................................................................... 50
4. Nested PCR ........................................................................................................... 51
5. Touchdown PCR ..................................................................................................... 52
3.12. Kolonie PCR ....................................................................................................... 52
4. Enzymen van de recombinant DNA technologie .......................................................... 54
4.1. Nucleasen ............................................................................................................. 54
1. Algemeen .............................................................................................................. 54
2. Enzymatische fragmentatie voor DNA ..................................................................... 54
3. Enzymatische fragmentatie voor RNA ..................................................................... 55
4. Reverse transcriptase............................................................................................. 55
5. Terminaal deoxynucleotidyl transferase (TdT) .......................................................... 56
4.2. Het immuunsysteem van bacteriën ........................................................................ 57
1. Restrictie modificatie systemen .............................................................................. 57
2. CRISPR CAS systeem in bacteriën en archea........................................................... 57
4.3. Restrictie-endonucleasen ...................................................................................... 58
1. Nomenclatuur ....................................................................................................... 58
2. Type restrictie enzymen .......................................................................................... 58
3. Karakteristieken van type II endonucleasen ............................................................. 58
4. perfecte palindromen............................................................................................. 59
5. Aanmaak van recombinante constructen ................................................................ 60
4.4. Restrictie analyse en fysische kartering................................................................... 60
4.5. Bijzondere aspecten............................................................................................... 62
1. Isocaudomeren, isoschizomeren en neoschizomeren ............................................. 62
3
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper lowieboels. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €13,48. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 67866 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen