100% tevredenheidsgarantie Direct beschikbaar na betaling Zowel online als in PDF Je zit nergens aan vast
logo-home
Eerder door jou gezocht
Eerder door jou gezocht
logo
Samenvatting Biochemische Technieken DEEL 1 €7,16
In winkelwagen
Snel navigeren naar
Voorbeeld
  2.  
  3. Artesis Plantijn Hogeschool Antwerpen (Artesis)
  4.  
  5. Biochemie
  6.  
  7. Biochemische Technieken (AP221613)

Samenvatting

Samenvatting Biochemische Technieken DEEL 1
 0 keer bekeken  0 keer verkocht

Een zelf getypte samenvatting van deel 1 van het vak biochemische technieken. Gegeven door mevrouw Soetaert op AP hogeschool in de het derde jaar biochemie (afstudeerrichting van chemie). In de samenvatting staan bepaalde onderwerpen aangeduid die ze in de les aangaf dat mogelijke examenvragen zijn...

[Meer zien]

Voorbeeld 4 van de 48  pagina's

Document informatie

  • 17 december 2024
  • 48
  • 2024/2025
  • Samenvatting

Onderwerpen

Geschreven voor

Alle documenten voor dit vak (1)

Verkoper

avatar-seller
LouisePeeters

Ontvangen beoordelingen

Voorbeeld van de inhoud

= examenvraag




Biochemische Technieken
Deel 1: Biochemische werkwijzen



Inhoudsopgave
1 Inleiding..................................................................................................... 4

2 Waterdiverse stoffen – Buffers.....................................................................5

2.1 Eigenschappen van water......................................................................................... 6
2.1.1 Inwendige structuur van water............................................................................6
2.1.2 Hydrofobe interacties..........................................................................................6
2.2 Invloed van diverse stoffen.......................................................................................6
2.2.1 Interactie met water............................................................................................6
2.2.1.1 Organische solventen....................................................................................7
2.2.1.2 Zouten........................................................................................................... 7
2.2.1.3 Ureum en guanidine-HCl................................................................................7
2.2.1.4 Chaotrope stoffen.......................................................................................... 8
2.2.2 Directe interactie met de biomolecule.................................................................8
2.2.2.1 Ionogene zepen............................................................................................. 8
2.2.2.2 Niet-ionogene zepen......................................................................................9
2.2.2.3 Zwitterionen.................................................................................................. 9
2.2.2.4 Reductantia voor disulfidebindingen...........................................................10
2.2.2.5 SH-reagentia................................................................................................ 10

3 Homogenisatie van cellen en weefsels........................................................10

3.1 Uitgangsmateriaal................................................................................................... 11
3.1.1 Soort.................................................................................................................. 11
3.1.2 Plaats................................................................................................................. 11
3.1.3 Tijdstip............................................................................................................... 11

3.2 Activiteit van hydrolytische enzymen......................................................................12
3.3 Homogenisatiemethoden........................................................................................12
3.3.1 Algemene richtlijnen.......................................................................................... 12
3.3.2 Methodes........................................................................................................... 12
3.3.2.1 Potter-Elvehjem buis....................................................................................13
3.3.2.2 Blender........................................................................................................ 13
3.3.2.3 Mortier......................................................................................................... 13
3.3.2.4 Schudden met glaskorrels...........................................................................13
3.3.2.5 Toepassing van druk...................................................................................13
3.3.2.6 Osmotische shock........................................................................................ 13
3.3.2.7 Chemisch: SDS + EDTA...............................................................................13
3.3.2.8 Ultrasonoor geluid.......................................................................................14
3.3.2.9 Enzymatisch................................................................................................ 14

,4 Zuivering van nucleïnezuren......................................................................14
4.1 Algemene strategie................................................................................................. 14
4.1.1 Uitgangsmateriaal............................................................................................. 14
4.1.2 Extractiemethoden............................................................................................ 15

4.2 Beschadiging van nucleïnezuren.............................................................................15
4.2.1 Chemische schade............................................................................................. 15
4.2.2 Biologische schade............................................................................................ 16
4.2.2.1 DNA-nucleasen of DNasen...........................................................................16
4.2.2.2 RNA-nucleasen of RNasen...........................................................................16
4.2.3 Stralingsschade................................................................................................. 17
4.2.4 Mechanische schade.......................................................................................... 17
4.3 Concentratiebepaling.............................................................................................. 17
4.3.1 UV-absorptie...................................................................................................... 17
4.3.1.1 Absorptiecentrum........................................................................................17
4.3.1.2 Extinctiecoëfficiënt bij 260 nm....................................................................17
4.3.2 Fluorescentie..................................................................................................... 18
4.3.2.1 Ethidiumbromide......................................................................................... 18
4.3.2.2 Submarine elektroforese.............................................................................18
4.3.2.3 GelRed......................................................................................................... 18
4.3.2.4 SYBRgreen................................................................................................... 19
4.2.3.5 Qubit fluorometer........................................................................................19
4.3.3 Capillaire elektroforese......................................................................................19
4.3.4 Kleurreacties...................................................................................................... 19
4.3.5 Radioactieve detectie........................................................................................19

4.4 Denaturatie en renaturatie......................................................................................20
4.4.1 Denaturatie....................................................................................................... 20
4.4.2 Renaturatie........................................................................................................ 20
4.4.3 Smelttemperatuur............................................................................................. 20

4.5 Isolatie en zuivering................................................................................................ 22
4.5.1 Manuele methodes............................................................................................ 22
4.5.1.1 Isolatie van hoogmoleculair DNA.................................................................22
4.5.1.2 Plasmide-isolatie.......................................................................................... 23
4.5.1.3 Isolatie mRNA.............................................................................................. 23
4.5.2 Kits.................................................................................................................... 24

4.6 Zuiverheid............................................................................................................... 25
4.7 Identificatie............................................................................................................. 25

4.8 Restrictie-enzymen.................................................................................................. 25
4.8.1 Endonuclease of restrictie-enzymen..................................................................25
4.8.2 Restrictie-enzymklassen....................................................................................25
4.8.3 Steractiviteit...................................................................................................... 26
4.8.4 Isochizomeren................................................................................................... 26
4.8.5 Naamgeving...................................................................................................... 26
4.8.6 Activiteit............................................................................................................ 27
4.8.7 Reactieomstandigheden....................................................................................27
4.8.8 Gevoeligheid voor dam en dcm methylatie.......................................................28
4.9 Oefeningen.............................................................................................................. 29


2
Louise Peeters Samenvatting

,5 Zuivering van eiwitten...............................................................................32
5.1 Algemene strategie................................................................................................. 32

5.2 Efficiëntie van de zuiveringsstap.............................................................................34
5.3 Concentratiebepaling (!!)........................................................................................34
5.3.1 Eenheid van concentratie..................................................................................34
5.3.2 Methoden.......................................................................................................... 35
5.3.2.1 UV-absorptie................................................................................................ 35
5.3.2.2 Biureetreactie.............................................................................................. 35
5.3.2.3 Bradford methode.......................................................................................36
5.3.2.4 Bepaling van het drooggewicht...................................................................36

5.4 Fractionering........................................................................................................... 36
5.4.1 Oplosbaarheid................................................................................................... 36
5.4.1.1 Isoëlektrische precipitatie............................................................................37
5.4.1.2 Zoutprecipitatie........................................................................................... 37
5.4.2 Ammoniumsulfaat-fractionatie..........................................................................37
5.4.2.2 Centrifugeren.............................................................................................. 38
5.4.2.3 Op punt stellen van de fractionering...........................................................39
5.4.3 Oplosmiddelfractionering...................................................................................39
5.4.4 Selectieve denaturatie.......................................................................................40
5.5 Verwijdering van zouten.......................................................................................... 40
5.5.1 Gelpermeatiechromatografie.............................................................................40
5.5.2 Filtratie.............................................................................................................. 41
5.5.2.1 Structuur..................................................................................................... 41
5.5.2.2 Karakterisering van een membraan............................................................41
5.5.2.3 Transport door een membraan....................................................................41
5.5.3 Dialyse............................................................................................................... 42

5.6 Bewaring................................................................................................................. 42
5.7 Maken van een eiwitoplossing.................................................................................43
5.7.1 Oplossen van het eiwit......................................................................................43
5.8 Detectie van denaturatie.........................................................................................43

6 Eiwitkarakterisatie....................................................................................43
6.1 Primaire structuur = AZ-sequentie..........................................................................43
6.1.1 Edman degradatie............................................................................................. 43
6.1.2 Vertaling DNA.................................................................................................... 45
6.1.3 Peptide massa ‘fingerprint’ analyse...................................................................46
6.2 Conformatie............................................................................................................. 46
6.2.1 X-stralen kristallografie......................................................................................46
6.2.2 Elektronenmicroscopie......................................................................................46
6.2.3 NMR spectroscopie............................................................................................ 46

7 Proteomics................................................................................................ 47

7.1 Wat is proteomics.................................................................................................... 47
7.2 Waarom proteomics................................................................................................ 47

7.3 Traditionele proteomics........................................................................................... 47

3
Louise Peeters Samenvatting

, 7.3.1 Tweedimensionale gelelektroforese..................................................................47
7.3.2 Beeldanalyse..................................................................................................... 47
7.3.3 Massaspectrometrie.......................................................................................... 48
7.3.3.1 Vormen van ionen.......................................................................................48
7.3.3.2 Analyse van ionen in TOF massaspectrometer............................................48
7.3.4 Bioinformatica................................................................................................... 48

7.4 Praktisch voorbeeld.................................................................................................48




1 Inleiding
 Dit schema is algemeen geldig of men eiwit isoleert uit zijn natuurlijk milieu of
aangemaakt heeft via recombinant-DNA-technologie




4
Louise Peeters Samenvatting

Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:

√ Verzekerd van kwaliteit door reviews

√ Verzekerd van kwaliteit door reviews

Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!

Snel en makkelijk kopen

Snel en makkelijk kopen

Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.

Focus op de essentie

Focus op de essentie

Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!

Veelgestelde vragen

Wat krijg ik als ik dit document koop?

Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.

Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?

Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.

Van wie koop ik deze samenvatting?

Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper LouisePeeters. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.

Zit ik meteen vast aan een abonnement?

Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €7,16. Je zit daarna nergens aan vast.

Is Stuvia te vertrouwen?

4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)

Afgelopen 30 dagen zijn er 56326 samenvattingen verkocht

Opgericht in 2010, al 14 jaar dé plek om samenvattingen te kopen

Start met verkopen
€7,16
  • (0)
In winkelwagen
Toegevoegd