HOOFDSTUK 1: PREPARENEN EN OBSERVEREN VAN CELLEN EN WEEFSELS
1. CELLEN
Cellijnen niet echt stabiel
Cellen veranderen doordat ze splitsen
Cultuurcondities:
Cultuurrecipiënten:
Gesloten flessen, rollerflessen in warme kamer, open platen, CO2 oven
Oorsprong van cellen, cellijnen:
Cellen kunnen afkomstig zijn van andere laboratoria, eigen isolatie (primaire culturen) of celbanken
(bijvoorbeeld ATTC)
Groeisubstraten en -procedures
• Substraat (vaak plasticje) beschermt tegen anoïkis en is essentieel voor adherente
celculturen
• in vitro condities vergelijkbaar maken met in vivo situatie
• Cellen hebben soms signalen/stoffen van omliggende cellen nodig, bv. van de moedercel
, • Cellen in cultuur delen tot ze een confluente 2D-monolayer vormen, dan ‘contactinhibitie’
van celproliferatie
➔ Cellen beginnen te splitsen
Tumorcellen kunnen het vermogen van contactinhibitie hebben verloren. Dan kunnen ze in een
groepje/hoopje gaan groeien
MDCK cellen kunnen ook groeien op een medium
Celtransfer van:
• Suspensiecultures:
• Adherente cellen: behandeld met trypsine en EDTA (→ calcium en magnesium)
➔ Cellen komen los van het substraat en van elkaar en worden gesplitst
Het werken met cellen in een laminaire flowbench → steriele omstandigheden
Invriezen in vloeibare stikstof
CO2 oven
Differentiatie in vitro
Differentiatie in cultuur van een myoblast naar een myotube
Stamcel: kan zich voortdurend delen en differentiëren in alle soorten cellen/weefsels
• Totipotente stamcellen: ontwikkelt tot een foetus
• Multipotente stamcellen: kunnen in verschillende celtypes uitgroeien
Embryonale stamcellen → ethisch debat
Geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs): cellen worden geïsoleerd en bewerkt → maken van
neuronen, hartcellen, gebruiken voor medische screening
Pluripotente stamcellen in vitro: in vitro organen gemaakt
2. WEEFSELS
Weefsels moeilijk om te snijden → daarom paraffine gebruikt → weefsel wordt vast en makkelijk te
besnijden
Als een weefselstukje uit zijn normale in vivo situatie wordt weggenomen, worden afbraakenzymen
actief wat leidt tot degradatie van het weefsel
, ➔ Afbraakenzymen tegengaan door weefsel te bevriezen of door gebruik te maken van
chemische fixatiemiddelen (bv. cross-linken met formol/formaldehyde). Bewaren van
weefsels met behoud van oorspronkelijke structuur = denatureren van eiwitten
Artefacten = veranderingen die tijdens de fixatie in een weefsel ontstaan en afwijken van de in vivo
situatie
Chemische fixatieven resulteren over ‘t algemeen in een betere morfologie
koude fixatie laat snel doorwerken van materiaal toe en bewaart beter de epitopen voor
immuunkleuringen → bv. in labo
inbedden:
• Inbedmiddel meestal hydrofoob
• Inbedmiddel moet volledig binnendringen in weefsel anders ingebed materiaal dat moeilijk
te besnijden is
• Water moet verwijderd worden zodat de hydrofobe inbedmiddelen kunnen binnendringen
• Gebruik van alcohol om water te verwijderen
• clearing’ mbv tolueen, mengbaar met alcohol en het inbedmiddel
paraffine is vrij zacht, hars en plastics
zijn zeer hard
A. Lichtmicroscoop
Resolutie = 200 nm
Resolutie of oplossend vermogen = de kleinste afstand waarmee twee punten nog net gescheiden
worden weergegeven
, meeste preparaten bekeken met doorvallend
wit licht = helderveld/klaarveld-LM (bright
field)
drie lenssystemen: de condensor, het
objectief en de oculairen
condensor bundelt het doorvallende licht op
het preparaat → bepaalt de resolutie,
kwaliteit en lichtsterkte van het beeld
objectief kijkt met een korte werkafstand
naar het preparaat en vormt een vergroot
beeld
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper cocquytmathijs. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €11,06. Je zit daarna nergens aan vast.