Doel: biopsiefragmenten onderzoeken + cel/weefsel structuren
onderscheiden
Techniek: chemische bestanddelen (EW, V, KH, Z) vastleggen
+ morfologische cellulaire structuren behouden
Effecten:
Preventie van autolyse + putrefactie
- autolyse = afbraak van cellen door enzymen -> tgv lysosomen
- putrefactie = afbraak van weefsels door bacteriële activiteit
-> gepaard met gasformatie
Behouden van cellen/weefsel bestanddelen in zo getrouw mogelijke
toestand
Harden van weefsels
Brekingsindex stijgt
Meer selectieve kleuring
Soorten fixatieven:
Formaldehyde
-> meest gebruikte fixatief
-> gas, oplosbaar in water (40% van zijn gewicht)
-> commercieel verkrijgbaar als formol (40% formaldehyde)
-> meestal 10% formoloplossing (4% formaldehyde)
-> geïncorporeerd in vele andere fixatieven
-> fosfaatbuffer aan toevoegen om oxidatie tegen te gaan
(anders verzuring met vorming van storend formolpigment)
Ethylalcohol (C2H5OH)
-> weinig nut (enkel bloeduitstrijkjes)
-> penetreert traag, verharding duurt lang
-> + andere reagentia (Carnoy’s vloeistof) -> fixatie sneller
-> effecten: - denaturatie eiwitten
- precipatie glycogeen
- lost vetten op
Aceton
-> werking analoog aan ethylalcohol (glycogeen niet goed bewaard)
-> niet meer routinematig gebruikt
Alcoholisch formol
-> bestaat uit: formol + 90% alcohol
-> soms gebruikt voor fixatie KH -> fixatie volledig na 6-8 uur
Carnoy’s vloeistof
-> bestaat uit: 100 % alcohol + chloroform + azijnzuur
-> snelle penetratie, goede kernfixatie met bewaring RER en
glycogeen
-> veroorzaakt belangrijke krimping + vernietigt meeste
cytoplasmatische
elementen
-> fixatie volledig in 1-2 uur (kleine fragmenten al na 15 min)
, 2 Inbedding
Na fixatie moet weefsel verhard worden om te kunnen snijden
soorten inbeddingsmiddelen:
o Inbedding en impregnatie met gelatine (ideaal voor bot)
o Inbedding en impregnatie met paraffine (meeste)
o Inbedding in plasticsoorten (harsen)
Paraffine inbedding:
Stap 1: dehydratatie
-> water wordt uit weefselfragmenten gehaald via alcohol reeks
-> alcohol reeks bestaat uit: serie baden met stijgende alcoholconc.
Stap 2: clearing
-> alcohol en paraffine niet mengbaar dus intermediaire vloeistof
gebruiken die
wel mengbaar is met beide -> ethanol wordt vervangen door
deze 3de vloeistof
(dan wordt het transparant)
-> soorten clearingmiddelen:
- chloroform: duurt te lang
- benzeen: zeer toxisch
- tolueen en xyleen: enkel nog gebruikt voor immunokleuring
-> kleine fragmenten klaar in 30-60 min / grote fragmenten: 2-
4 uur
- NEOCLEAR: vervangmiddel tolueen en xyleen (nu meest
gebruikt)
Stap 3: impregnatie met vloeibaar paraffine
-> paraffine verwarmen tot enkele graden boven smeltpunt (60°C)
-> weefsel wordt hier dan ingebracht
-> door de warmte verdampt neoclear en wordt progressief
vervangen door
vloeibare paraffine
Stap 4: inbedding
manueel:
-> geïmpregneerde weefselfragmenten in blokken gieten
-> weefselstuk met te snijden opp. op bodem van vorm leggen
-> overgieten met vloeibare paraffine
-> snel afkoelen om kristallisatie te voorkomen
-> na harding vorm verwijderen -> klaar om gesneden te worden
paraffinedispensor:
-> geïmpregneerde weefsel in metalen kuipje plaatsen (60°C)
-> door druk op knop: gekende hoeveelheid paraffine bedekt
weefsel
-> metalen kuipje op koelplaat -> paraffine kan inkrimpen
-> blokje kan gedemouleerd worden
3 Snijden van weefsels
Type instrumenten:
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
√ Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, Bancontact of creditcard voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper amyvanhorenbeeck11. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,49. Je zit daarna nergens aan vast.