Overig
Selfstudy assignment answers lecture 4-5
Answers of the self study assignments that you could use as exam practice
[Meer zien]Voorbeeld 1 van de 4 pagina's
Voorbeeld 1 van de 4 pagina's
In winkelwagengesponsord bericht van onze partner
Verkoper
Volgen
Voorbeeld van de inhoud
1. a. Gateway cloning allows for directional cloning of pieces ofDNA. How should one create the sequence fragment so that
it can be used in the Gateway system?
Het heft een recognition site nodig die herkend kan worden door
recombinase waardoor de sequentie van interesse ‘’geflipt’’ kan
worden naar de entry clone.
The BP reaction, PCR with a primer that is specific for your target of
interest with a tail. With the PCR you will amplify the region of
interest and you will add the attp sites. Using the donor vector you
can flip them to the entry clone
So PCR based.
b. Make an overview of the enzymes needed for classical
molecular cloning,
Gibson assembly, and Gateway cloning. How do they
compare?
Classical molecular cloning: type II restriction enzymes (which
recognize and cut directly within the recognition site)
Gibson cloning: DNA polymerase, ligase, nuclease
Gateway cloning: recombinase (restriction enzyme + ligase)
Classical: restriction enzymes, DNA ligases (+Pol or Exo, to blunt)
Gibson: cocktail of Pol, 5’exo and DNA ligase
Gateway cloning: recombinase (restriction enzyme + ligase)
Gibson cloning is without restriction enzymes and classical molecular
cloning + gateway cloning is with the use of restriction enzymes. At
Gibson you have overhanging ends and with the use of exonuclease
can be turned into sticky ends.
Practical points: difference in buffers needed, incubation
temperatures, phosphorylation status, methylation status, etc.
c. Is it possible to use the Gateway system for the
generation of fusion protein constructs?
Yes but you have to be aware that there will still be att sites present,
meaning that infront of after your gene, the recognition sites will still
be there. You have to consider reading frames that ‘run’ over the
attp sites.
2. For each type of transfection method (chemical, physical,
biological)
a. list two common examples
b. indicate their main application
c. decide where they reside on the ‘transient versus stable’
axis and whether they may damage the host genome. It
depends on what happens in the nucleus with those DNA fragments.
If the cell is having homology arms and it is driving homology
directed repair then it is stable. If it is linear it is more prone to
become stable. If it is a plasmid it needs to be opened up before you
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper MeijersCB. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €5,22. Je zit daarna nergens aan vast.
Is Stuvia te vertrouwen?
4,6 sterren op Google & Trustpilot (+1000 reviews)
Afgelopen 30 dagen zijn er 49270 samenvattingen verkocht
Opgericht in 2010, al 15 jaar dé plek om samenvattingen te kopen